產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
Dickkopf相關(guān)蛋白1（DKK-1）屬于Dickkopf家族的成員。其成員大多具有抑制Wnt信號通路，在脊椎動物發(fā)育過程起重要作用，也與骨形成，腫瘤和阿爾茲海默癥有關(guān)。DKK-1是一種分泌蛋白，其與Wnt受體LRP5/6及另一類穿膜蛋白Kremen1/2結(jié)合，形成三聚體，誘導快速的細胞內(nèi)吞，減少細胞膜上的LRP5/6，由此阻斷了Wnt信號向胞內(nèi)的傳遞。DKK1的表達水平與骨髓源性抑制細胞（MDSCs）的浸潤水平正相關(guān)，同時其與骨病，風濕病等的關(guān)聯(lián)，使其稱為臨床研究的重要靶點。
翌圣Human DKK-1 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定血清、血漿和細胞培養(yǎng)上清中的DKK-1。特異性抗DKK-1抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本，經(jīng)過孵育，樣本中存在的DKK-1與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中DKK-1的濃度成正比。加入終止液終止反應，在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。
產(chǎn)品信息
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貨號 |
97014ES48 / 97014ES96 |
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規(guī)格 |
48 T / 96 T |
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檢測范圍 |
31.25-2000 pg/mL |
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檢測方法 |
雙抗夾心法 |
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檢測時長 |
4.5小時 |
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靈敏度 |
19.2 pg/mL |
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稀釋線性 |
77 - 121% |
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回收率 |
77 - 122% |
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板內(nèi)差 |
5.1% |
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板間差 |
6.7% |
標曲制定
計算標準品和樣本復孔的平均OD值，并減去空白孔的平均OD值作為校準OD值。以標準品濃度的對數(shù)為橫坐標，校準OD值的對數(shù)為縱坐標繪制標準曲線。多種繪圖和統(tǒng)計學軟件可以用于輔助繪制標準曲線并進行未知樣本濃度的計算。四參數(shù)擬合法往往擬合效果較好，其它方法如線性擬合也可能獲得較好擬合結(jié)果，需要根據(jù)具體實驗數(shù)據(jù)進行分析。
實驗數(shù)據(jù)
- 標曲數(shù)據(jù)
數(shù)據(jù)擬合繪制標準曲線，生成的標曲用于實驗數(shù)據(jù)分析。
- 靈敏度檢測
DKK-1的最低檢測限為19.2 pg/mL，通過使用重復檢測20次零孔OD值的均值與標準差計算得出。
- 精密度檢測
酶標板內(nèi)精密度
3個已知濃度的樣本酶標板內(nèi)重復測定6次，評估酶標板內(nèi)的精密度。
酶標板間精密度
3個已知濃度的樣本酶標板間重復檢測30次，評估酶標板間的精密度。
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項目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
||||
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樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
6 |
6 |
6 |
22 |
22 |
22 |
|
|
平均值 |
968.56 |
247.11 |
71.97 |
988.44 |
261.31 |
68.73 |
|
標準差 |
32.00 |
12.95 |
4.83 |
48.74 |
22.34 |
4.70 |
|
變異系數(shù)（%） |
3.3 |
5.2 |
6.7 |
4.9 |
8.5 |
6.8 |
- 回收率檢測
通過不同水平的DKK-1添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:
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樣本類型 |
平均回收率(%) |
范圍（%） |
|
血清 |
89.3 |
81.7-101.5 |
|
血漿 |
82.9 |
77.3-87.7 |
|
細胞培養(yǎng)上清 |
101.7 |
77.8-122.1 |
- 稀釋線性檢測
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血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
86.6 |
79.3-92.5 |
|
1:04 |
89.5 |
80.2-98.2 |
|
1:08 |
88.7 |
79.9-96.5 |
|
1:16 |
92.9 |
84.5-102.4 |
|
血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
89.3 |
83.5-97.0 |
|
1:04 |
93.4 |
81.6-99.9 |
|
1:08 |
104.6 |
83.4-121.2 |
|
1:16 |
101.8 |
77.2-114.6 |
|
細胞培養(yǎng)上清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
99.0 |
81.4-112.2 |
|
1:04 |
100.4 |
86.0-111.8 |
|
1:08 |
103.3 |
83.5-118.4 |
|
1:16 |
100.1 |
79.6-112.9 |
- 樣本值
應用本試劑盒，檢測若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。
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樣本類型 |
樣本數(shù)目 |
平均值（pg/mL） |
樣本值（pg/mL） |
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血清 |
10 |
n.d. |
n.d. |
|
血漿 |
8 |
569.8 |
391.5-1059.8 |
|
細胞培養(yǎng)上清 |
4 |
365.5 |
168.4-414.3 |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)得15.63 pg/mL
- 測定特異性
本試劑盒識別天然和重組DKK-1，沒有觀察到明顯的交叉反應和干擾影響。
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Recombinant human: |
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Cerberus |
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Dkk-2 |
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Dkk-3 |
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Dkk-4 |
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Kremen-1 |
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Kremen-2 |
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Soggy-1 |
檢測簡圖
疑問解答
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問題 |
造成原因 |
解決方法 |
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標曲不好 |
移液量不準確 |
檢查移液器，按時校準，仔細操作，充分混勻時蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
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稀釋方法不恰當 |
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顯色值偏低 |
孵育時間太短 |
給予足夠的孵育時間，樣本和溶解的標準品隔夜后更換。 |
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移液量不足或稀釋不當 |
校準移液器和規(guī)范操作 |
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CV偏高 |
酶標板清洗不當 |
使用正確的洗滌工序；如果使用洗板機，檢查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
準備新鮮洗液 |
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靈敏度較低 |
試劑盒儲存不當 |
按照產(chǎn)品組分表進行保存。 |
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