YeaCell^TM Reverse Transcriptase for Single Cell Full Length cDNA利用Oligo (dT)18及TSO Primer引物對少量模板以及低拷貝基因進行逆轉錄。其產(chǎn)物可以經(jīng)過通用引物進行PCR反應富集cDNA，然后使用翌圣的酶切建庫試劑盒，構建測序文庫。本產(chǎn)品采用了在M-MLV(RNase H-)Reverse Transcriptase基礎上經(jīng)過多點突變的全新逆轉錄酶，具有高逆轉錄效率，低錯配率，高保真度等優(yōu)勢。

 

產(chǎn)品組分

組分編號	名稱	13589ES08	13589ES95	13589ES96
13589-A	5×RT Buffer	600 μL	47 mL	60 mL
13589-B	Reverse Transcriptase for Single Cell Full Length cDNA	50 μL	4.8 mL	5 mL

 

運輸與保存方法

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

適用范圍

1.適用于哺乳動物或者沒有細胞壁的真核生物細胞的高通量單細胞全長cDNA合成。

2.10 pg~1 μg帶有poly（A）的總RNA。

3.本品不適合原核生物總RNA和有降解的RNA，如FFPE RNA。

 

注意事項

1.請使用無RNase污染的耗材，并對實驗區(qū)域定期進行清理，推薦使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM 高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。

2. 建庫需要的其他試劑需自備或另外購買。

3.本產(chǎn)品僅用作科研用途！

 

使用方法

Step 1 RNA變性

1.按照表1配置反應液：

表1 RNA預變性反應體系

名稱	體積（μL）
Oligo (dT)18（20~50 mM）(自備)	1
已裂解的cell or RNA	12
Total	13

2.使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底。于PCR儀上進行如下反應：（熱蓋80℃ on）70℃，5 min；立即置于冰上3 min。

Step 2 第一鏈cDNA的合成（1^st Strand Synthesis）

1. 將第一鏈合成試劑從-20°C取出，室溫解凍，顛倒混勻后瞬離。按表2所示，配制第一鏈cDNA合成的反應液。

表2 第一鏈cDNA合成反應體系

名稱	體積（μL）
上一步	13
5×RT Buffer	4
TSO Primer（20~50 mM）(自備)	1
RNase Inhibitor(40 U/µL)（自備）	1
Reverse Transcriptase for Single Cell Full Length cDNA	1
Total	20

2.使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底。于PCR儀上進行如下反應：（熱蓋105℃ on）42℃，90 min；70℃，15min；4℃，hold。

3.產(chǎn)物可直接用于二鏈cDNA合成或于-80℃暫存。

Ver. CN20230612