Nanobody-Tn5主要是將納米抗體與Tn5轉(zhuǎn)座酶進(jìn)行融合，制備出可結(jié)合兩種不同物種（小鼠和兔）一抗的anti-mouse Tn5和anti-rabbit Tn5。這兩種nanobody-Tn5中包埋含不同index的接頭序列時(shí)，Tn5切割染色質(zhì)即可將接頭插入到染色質(zhì)中，通過不同的index來區(qū)分來源于mouse的一抗靶向區(qū)域還是來源于rabbit一抗靶向的區(qū)域。該產(chǎn)品為裸酶，需要自己組裝接頭序列。

 

組分信息

組分編號(hào)	組分名稱	12595ES01	12595ES02	12595ES03
12595-A	Anti-mouse Tn5	10 μL	80 μL	100 μL
12595-B	Anti-rabbit Tn5	10 μL	80 μL	100 μL
12595-C	Assemble buffer	10 μL	80 μL	100 μL

 

儲(chǔ)存條件

-85~-65℃保存，有效期1年。

 

使用說明

以高通量測(cè)序建庫(kù)為例，在使用前，請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀使用說明。

1. 接頭制備

1）Illumina平臺(tái)參考引物名稱及序列：

Primer A-1：5'-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACATAAGGCTCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3' Primer A-2：5'-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACATATCCTTCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3'

Primer A-3：5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3′

Primer B：5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3′
Primer C：5'-phos-CTGTCTCTTATACACATCT-3'

2）將Primer A、Primer B、Primer C溶解至200 μM。

3） 分別配制如下反應(yīng)體系：

組分	反應(yīng)1
Primer B（200 μM）	10 μL
Primer C（200 μM）	10 μL
total	20 μL

 

 

組分	反應(yīng)2
Primer A-1 or A-2 or A-3（200 μM）	10 μL
Primer C（200 μM）	10 μL
total	20 μL

4）分別將反應(yīng)1和反應(yīng)2渦旋振蕩充分混勻，并短暫離心使溶液回到管底。置于PCR儀內(nèi)，進(jìn)行如下反應(yīng)程序：熱蓋105℃ On，94℃加熱2 min。時(shí)間到后，停止反應(yīng)程序，不要打開熱蓋，讓PCR管在PCR儀器中自然冷卻2 h，然后再于4℃中放置5 min。

5）反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)1和反應(yīng)2等體積混合，混勻。命名為Adapter Mix，-25~-15℃保存。

2．轉(zhuǎn)座子生成

1） 配置以下反應(yīng)體系：

組分	體積（μL）
Anti-mouse Tn5 or Anti-rabbit Tn5	10
Adapter mix (50 μM)	0.5
Assemble Buffer	0.5

2）反應(yīng)條件：使用移液器輕輕吹打充分混勻。置于25℃反應(yīng)1 h（熱蓋關(guān)閉）。反應(yīng)產(chǎn)物可直接應(yīng)用于建庫(kù)實(shí)驗(yàn)，或-25~-15℃保存。

 

注意事項(xiàng)

1. 轉(zhuǎn)座酶對(duì)溫度敏感，建議盡快完成接頭包埋，生成的轉(zhuǎn)座子可于-25~-15℃保存，有效期1年。

2. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20231008