本品采用了逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，使用SARS-CoV-2 Spike蛋白基因替換逆轉(zhuǎn)錄病毒的包膜蛋白基因，與逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝質(zhì)粒和CMV-GFP-T2A-Luciferase質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝含Spike蛋白突變位點(diǎn)(EG.5)基因的假病毒，假病毒表面能表達(dá)SARS-CoV-2 Spike蛋白，并且病毒同時(shí)攜帶GFP和Luciferase熒光素酶報(bào)告基因，可通過(guò)觀察熒光信號(hào)和檢測(cè)熒光素酶活性評(píng)價(jià)假病毒感染細(xì)胞的活性，該假病毒無(wú)自主復(fù)制能力，安全性好，可用于SARS-CoV-2受體和藥物篩選、中和抗體檢測(cè)及疫苗效果評(píng)價(jià)等試驗(yàn)。

EG.5是以是以NCBI Reference Sequence: NC_045512.2中的Spike蛋白為假病毒刺突蛋白，具體突變位點(diǎn)為T(mén)19I、L24del、P25del、P26del、A27S、Q52H、V83A、G142D、Y144del、H146Q、Q183E、V213E、G252V、G339H、R346T、L368I、S371F、S373P、S375F、T376A、D405N、R408S、K417N、N440K、V445P、G446S、F456L、N460K、S477N、T478K、E484A、F486P、F490S、Q498R、N501Y、Y505H、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、Q954H、N969K。

 

產(chǎn)品組分

組分編號(hào)	組分名稱(chēng)	產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
		12025ES50	12025ES70	12025ES80
12025	COVID-19-Spike(EG.5)Protein Pseudovirus	50 μL	4×50 μL	20×50 μL

 

保存方法

-80℃保存，有效期6個(gè)月。本品應(yīng)避免反復(fù)凍融，建議分裝保存。

 

注意事項(xiàng)

1、每批次病毒滴度均達(dá)到1×10⁶ TU/mL（HEK293T- ACE2）及以上，具體病毒滴度請(qǐng)參考具體批次號(hào)COA。

2、凍融會(huì)導(dǎo)致假病毒穩(wěn)定性降低，從而影響核酸抽提效果和QPCR檢測(cè)結(jié)果，使用時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、病毒操作時(shí)務(wù)必在二級(jí)或以上生物安全實(shí)驗(yàn)室或生物安全柜中進(jìn)行，不可使用普通超凈工作臺(tái)操作病毒。

4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，戴口罩并戴一次性手套操作。

5、如果使用時(shí)本品不慎濺到眼睛、皮膚或其他身體部位，請(qǐng)立即使用大量清水沖洗。

6、使用本品所產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)廢棄物需要通過(guò)高壓滅菌處理，按照醫(yī)療廢棄物處理要求進(jìn)行處理。

7、本產(chǎn)品僅供科研使用。

 

使用方法

1、細(xì)胞鋪板：

實(shí)驗(yàn)前一天，將待感染HEK293T-ACE2細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種量約為1×10⁴個(gè)細(xì)胞/孔，第二日，待細(xì)胞密度在30%左右時(shí)進(jìn)行病毒感染。

2、假病毒感染：

取出凍存的假病毒置于冰上融化或4℃條件下待其完全融化后，設(shè)計(jì)濃度梯度（一般需要設(shè)計(jì)3個(gè)濃度梯度），加入細(xì)胞培養(yǎng)體系中感染目的細(xì)胞。以HEK293T- ACE2細(xì)胞為例，加入病毒量約為0.1-1 μL/孔，病毒感染6h后更換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

3、感染檢測(cè)：

細(xì)胞感染假病毒換液48h后，通過(guò)熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達(dá)并檢測(cè)熒光素酶的活性以判定感染效率（假病毒對(duì)不同細(xì)胞的感染效率不同，正式實(shí)驗(yàn)前建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定最合適病毒添加量）。

 

Ver.20230814