產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是特異性最高的血管生成調(diào)控因子，可為內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。作為腫瘤基質(zhì)和毛細(xì)血管網(wǎng)形成的基礎(chǔ)，VEGF可抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，機(jī)制尚不明確。
翌圣Mouse VEGF ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定小鼠血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中的血管內(nèi)皮生長因子(Mouse VEGF)。特異性抗血管內(nèi)皮生長因子抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本，經(jīng)過孵育，樣本中存在的血管內(nèi)皮生長因子與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測抗體（生物素標(biāo)記）孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(HRP標(biāo)記鏈霉親和素)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中血管內(nèi)皮生長因子的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 主波長，630nm次波長測定吸光度值。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
98020ES48 / 98020ES96 |
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規(guī)格 |
48 T / 96 T |
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檢測范圍 |
6.25-400 pg/mL |
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檢測方法 |
雙抗夾心法 |
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檢測物種 |
小鼠 |
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檢測時(shí)長 |
4小時(shí)30分鐘 |
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靈敏度 |
0.11 pg/mL |
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稀釋線性 |
96.7-126.9% |
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回收率 |
77.1 - 124% |
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板內(nèi)差 |
4.4% |
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板間差 |
6.33% |
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
- 標(biāo)曲數(shù)據(jù)
數(shù)據(jù)擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，生成的標(biāo)曲用于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
- 靈敏度檢測
血管內(nèi)皮生長因子的最低檢測限為0.11 pg/mL，通過使用重復(fù)檢測20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得出。
- 精密度檢測
酶標(biāo)板內(nèi)精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測定20次，評(píng)估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。
酶標(biāo)板間精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測36次，評(píng)估酶標(biāo)板間的精密度。
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項(xiàng)目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
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樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
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20 |
20 |
20 |
36 |
36 |
36 |
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平均值 |
9.35 |
41.89 |
177.21 |
9.89 |
42.80 |
179.60 |
|
標(biāo)準(zhǔn)差 |
0.36 |
1.98 |
8.26 |
0.81 |
2.70 |
8.00 |
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變異系數(shù)（%） |
3.84 |
4.73 |
4.66 |
8.21 |
6.32 |
4.45 |
- 回收率檢測
通過不同水平的血管內(nèi)皮生長因子添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:
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樣本類型 |
平均回收率(%) |
范圍（%） |
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血清 |
88.8 |
77.1-103.6 |
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血漿 |
89.5 |
86.4-91.5 |
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細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
110.0 |
97.1-124.0 |
- 稀釋線性檢測
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血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
107.6 |
105.3-109.5 |
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1:04 |
112.1 |
109.9-115.2 |
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1:08 |
116.3 |
110.0-124.2 |
|
1:16 |
122.9 |
112.2-126.9 |
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血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
103.7 |
102.4-105 |
|
1:04 |
107.6 |
104.1-111.1 |
|
1:08 |
111.8 |
111.3-112.4 |
|
1:16 |
122.4 |
118.5-126.3 |
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細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
102.8 |
100.3-105.3 |
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1:04 |
104.1 |
104.0-104.2 |
|
1:08 |
99.4 |
96.7-102.1 |
|
1:16 |
99.1 |
98.1-100.1 |
- 樣本值
應(yīng)用本試劑盒，檢測若干樣本，背景不詳。
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樣本類型 |
樣本數(shù)目 |
平均值（pg/mL） |
樣本值（pg/mL） |
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細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
10 |
n.d. |
n.d. |
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血清 |
10 |
85.20 |
58-101 |
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血漿 |
5 |
116.80 |
98-134 |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)的6.25 pg/mL
- 測定特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組小鼠血管內(nèi)皮生長因子。配制50ng/ml的下述因子進(jìn)行了特異性的評(píng)估，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。
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Recombinant mouse: |
Recombinant human: |
Other Recombinants: |
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VEGF R2/Fc Chimera |
VEGF121 |
canine VEGF |
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VEGF165 |
feline VEGF |
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VEGF165/PIGF |
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檢測簡圖
疑問解答
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問題 |
造成原因 |
解決方法 |
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標(biāo)曲不好 |
移液量不準(zhǔn)確 |
檢查移液器，按時(shí)校準(zhǔn)，仔細(xì)操作，充分混勻時(shí)蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
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稀釋方法不恰當(dāng) |
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顯色值偏低 |
孵育時(shí)間太短 |
給予足夠的孵育時(shí)間，樣本和溶解的標(biāo)準(zhǔn)品隔夜后更換。 |
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移液量不足或稀釋不當(dāng) |
校準(zhǔn)移液器和規(guī)范操作 |
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CV偏高 |
酶標(biāo)板清洗不當(dāng) |
使用正確的洗滌工序；如果使用洗板機(jī)，檢查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
準(zhǔn)備新鮮洗液 |
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靈敏度較低 |
試劑盒儲(chǔ)存不當(dāng) |
按照產(chǎn)品組分表進(jìn)行保存。 |
