Mouse BDNF ELISA Kit 小鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子ELISA試劑盒
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產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）是1982年Barde等首先在豬腦中發(fā)現(xiàn)的一種具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用的蛋白質(zhì)，屬于NGF家族神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的成員，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中特定神經(jīng)元亞群分化和存活所必需的。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白家族由至少四種蛋白質(zhì)組成，包括NGF，BDNF，NT-3和NT-4/5。這些分泌的細(xì)胞因子被合成為前前肽，其被蛋白水解處理以產(chǎn)生成熟的蛋白質(zhì)。所有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子都有六個(gè)保守的半胱氨酸殘基，它們參與三個(gè)二硫鍵的形成，并且在氨基酸水平上都共享約55%的序列同源性。與NGF類(lèi)似，生物活性BDNF被預(yù)測(cè)為非共價(jià)連接的同源二聚體。BDNF可以與低親和力細(xì)胞表面受體LNGFR結(jié)合，該受體也結(jié)合其他神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，如NGF，NT-3和NT-4。然而，BDNF通過(guò)高親和力細(xì)胞表面受體gp145/trkB發(fā)出信號(hào)來(lái)介導(dǎo)其神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)特性。
翌圣Mouse BDNF ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，用于定量測(cè)定血清、血漿中的小鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Mouse BDNF)。特異性抗小鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本，經(jīng)過(guò)孵育，樣本中存在的小鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測(cè)抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中小鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(zhǎng)(參考波長(zhǎng)570 - 630 nm)測(cè)定吸光度值。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
98030ES48 / 98030ES96 |
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規(guī)格 |
48 T / 96 T |
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檢測(cè)范圍 |
31.25-2000 pg/mL |
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檢測(cè)方法 |
雙抗夾心法 |
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檢測(cè)物種 |
小鼠 |
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檢測(cè)時(shí)長(zhǎng) |
4.5小時(shí) |
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靈敏度 |
9.7 pg/mL |
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稀釋線性 |
79 - 123% |
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回收率 |
83 - 110% |
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板內(nèi)差 |
3.2% |
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板間差 |
8.2% |
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
- 標(biāo)曲數(shù)據(jù)
數(shù)據(jù)擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，生成的標(biāo)曲用于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析。
- 靈敏度檢測(cè)
BDNF的最低檢測(cè)限為9.7 pg/mL，通過(guò)使用重復(fù)檢測(cè)20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得出。
- 精密度檢測(cè)
酶標(biāo)板內(nèi)精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測(cè)定8次，評(píng)估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。
酶標(biāo)板間精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測(cè)24次，評(píng)估酶標(biāo)板間的精密度。
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項(xiàng)目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
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樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
8 |
8 |
8 |
24 |
24 |
24 |
|
|
平均值 |
830.6 |
268.3 |
76.0 |
805.3 |
250.4 |
77.4 |
|
標(biāo)準(zhǔn)差 |
21.1 |
10.1 |
2.6 |
60.8 |
19.5 |
7.0 |
|
變異系數(shù)（%） |
2.5 |
3.8 |
3.4 |
7.6 |
7.8 |
9.1 |
- 回收率檢測(cè)
通過(guò)不同水平的BDNF添加于樣本中來(lái)測(cè)定回收率，其回收率如下:
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樣本類(lèi)型 |
平均回收率(%) |
范圍（%） |
|
血清 |
89.9 |
83.5-94.9 |
|
血漿 |
94.9 |
86.2-110.2 |
|
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
91.2 |
83.4-100.0 |
- 稀釋線性檢測(cè)
|
血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
108.8 |
103.4-116.8 |
|
1:04 |
118.7 |
116.5-123.1 |
|
1:08 |
110.5 |
106.8-115.4 |
|
1:16 |
100.6 |
90.7-106.8 |
|
血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
108.8 |
103.4-116.8 |
|
1:04 |
118.7 |
116.5-123.1 |
|
1:08 |
110.5 |
106.8-115.4 |
|
1:16 |
100.6 |
90.7-106.8 |
|
細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
95.7 |
87.2-106.3 |
|
1:04 |
101.4 |
86.1-111.6 |
|
1:08 |
109.5 |
94.1-122.1 |
|
1:16 |
100.3 |
78.6-114.2 |
- 樣本值
應(yīng)用本試劑盒，檢測(cè)若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。
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樣本類(lèi)型 |
樣本數(shù)目 |
平均值（pg/mL） |
樣本值（pg/mL） |
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血清 |
8 |
n.d. |
n.d. |
|
血漿 |
8 |
n.d. |
n.d. |
|
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測(cè)范圍內(nèi)得31.25 pg/mL
- 測(cè)定特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組小鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。下述因子進(jìn)行了特異性的評(píng)估，沒(méi)有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。
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Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
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CNTF |
β-NGF |
|
β-NGF |
NGF R |
|
NGF R |
NT-4 |
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NT-3 |
TrkB |
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NT-4 |
TrkC |
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TrkA |
|
|
TrkB |
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檢測(cè)簡(jiǎn)圖
疑問(wèn)解答
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問(wèn)題 |
造成原因 |
解決方法 |
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標(biāo)曲不好 |
移液量不準(zhǔn)確 |
檢查移液器，按時(shí)校準(zhǔn)，仔細(xì)操作，充分混勻時(shí)蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
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稀釋方法不恰當(dāng) |
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顯色值偏低 |
孵育時(shí)間太短 |
給予足夠的孵育時(shí)間，樣本和溶解的標(biāo)準(zhǔn)品隔夜后更換。 |
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移液量不足或稀釋不當(dāng) |
校準(zhǔn)移液器和規(guī)范操作 |
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CV偏高 |
酶標(biāo)板清洗不當(dāng) |
使用正確的洗滌工序；如果使用洗板機(jī)，檢查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
準(zhǔn)備新鮮洗液 |
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靈敏度較低 |
試劑盒儲(chǔ)存不當(dāng) |
按照產(chǎn)品組分表進(jìn)行保存。 |
