本產(chǎn)品適用于從細(xì)胞、動物組織（肝臟、腎臟、脾臟、腦、鼠尾等）中提取總RNA。采用獨特的磁珠及精心優(yōu)化的緩沖體系有效捕獲釋放的核酸，提取的核酸純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，提取的核酸適用于RT-PCR、Northern Blot、體外翻譯等實驗。本產(chǎn)品配合自動化核酸提取儀器使用，可實現(xiàn)核酸的高通量提取。

 

試劑盒組分

編號	組分名稱	18600ES50（50T）	18600ES60（100T）
18600-A	裂解液	23 mL	45 mL
18600-B	洗滌液A	44 mL	44 mL×2
18600-C	洗滌液B	18 mL	18 mL×2
18600-D	洗脫液	5 mL	10 mL
18600-E	磁珠懸浮液	1 mL×2	1 mL×4

18600ES50：使用前洗滌液A（18600-B）每瓶需加入44 mL無水乙醇，洗滌液B（18600-C）每瓶需加入72 mL無水乙醇

18600ES60：使用前洗滌液A（18600-B）每瓶需加入44 mL無水乙醇，洗滌液B（18600-C）每瓶需加入72 mL無水乙醇

 

運輸與保存方法

室溫運輸，室溫保存，有效期12個月。

 

注意事項

1. 試劑組分如有析出或渾濁（尤其冬季等室溫為低溫環(huán)境時），可45℃加熱至溶液澄清。

2. 漂洗液、洗滌液首次使用時，需按標(biāo)簽注明的體積添加無水乙醇。

3. 洗脫時可能存在磁珠殘留，吸取洗脫液時應(yīng)盡量避免吸入磁珠。

4. 凍存樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致樣品中核酸的質(zhì)量下降。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

 

操作方法

根據(jù)樣本量取相應(yīng)體積的裂解液，向裂解液中加入β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇至終濃度為1%，裂解液現(xiàn)配現(xiàn)用。

 

樣本前處理

1. 稱取5-20 mg的組織樣本，加入450 μL配制好的裂解液，充分勻漿，12000 rpm離心2 min后取上清液，得到樣本裂解液。
2. 取不超過50萬數(shù)量的細(xì)胞，離心去除上清液，加入450 μL配制好的裂解液，渦旋或用移液槍打散細(xì)胞，使細(xì)胞徹底裂解，靜置5 min，得到樣本裂解液。

細(xì)胞數(shù)量為50-100萬時，離心去除上清液，加入500 μL配制好的裂解液，渦旋或用移液槍打散細(xì)胞，使細(xì)胞徹底裂解，靜置5 min，得到樣本裂解液。

 

手動法提取

1. 取450 μL樣本裂解液至1.5 mL離心管中，加入400 μL異丙醇，20 μL磁珠懸浮液（若細(xì)胞數(shù)量為50-100萬，取500 μL樣本裂解液，加入400 μL異丙醇，40 μL磁珠懸浮液），充分渦旋振蕩使磁珠完全分散，將離心管置于旋轉(zhuǎn)混勻儀上混勻孵育10 min。

注意：磁珠懸浮液使用前需要充分搖勻。

2. 孵育結(jié)束后短暫離心，將離心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸棄液體。
3. 向離心管中加入800 μL洗滌液A（請確認(rèn)洗滌液A是否已添加無水乙醇），充分渦旋混勻1 min，然后將離心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸棄液體。
4. （可選）如需去除DNA，向離心管中加入6 μL DNase Ⅰ，74 μL RDD緩沖液，短暫渦旋振蕩使磁珠分散，室溫放置15 min，期間每隔5 min渦旋混勻1次。
5. 重復(fù)步驟3一次。
6. 向離心管中加入800 μL洗滌液B（請確認(rèn)洗滌液B是否已添加無水乙醇），充分渦旋混勻1 min，然后將離心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸棄液體。
7. 重復(fù)步驟6一次。
8. 打開離心管蓋，室溫或37℃加熱晾干至磁珠表面剛出現(xiàn)龜裂，注意不能過度干燥磁珠。
9. 向離心管中加入70 μL洗脫液，充分渦旋或移液器吹打使磁珠徹底分散，56℃加熱5 min，期間渦旋混勻數(shù)次。
10. 將離心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，將洗脫液溶液轉(zhuǎn)移至無RNA酶的離心管中，注意不要吸到磁珠。核酸溶液保存于-80℃。

 

HB221027