T4 RNA Ligase 1，即T4 RNA連接酶1，是一種ATP-依賴的可催化單鏈RNA、單鏈DNA或單核苷酸分子間或分子內(nèi)5'-P末端與3'-OH末端之間形成磷酸二酯鍵的酶。T4 RNA Ligase 1可進(jìn)行RNA之間的連接（效率最高），單鏈DNA與單鏈RNA之間的連接（效率不高），也可用于單鏈DNA之間的連接（效率很低）。適用于單鏈RNA分子的連接、NGS中miRNA文庫構(gòu)建的 5'端接頭連接。

 

產(chǎn)品信息

貨號	14651ES80/ 14651ES90
規(guī)格	1,000 U / 5,000 U
單位定義	在37℃條件下，30分鐘內(nèi)將1 nmol 的5 -[32P] rA16 轉(zhuǎn)化成磷酸鹽不溶物所需要的酶量定義為1 U。
來源	大腸桿菌表達(dá)的來源為T4嗜菌體的重組蛋白
推薦反應(yīng)條件	10×T4 RL1 Reaction Buffer：500 mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25℃)，100 mM MgCl2，20 mM DTT；最適37℃孵育。
失活條件	65℃加熱15 min或煮沸2 min可使T4 RNA Ligase 1失活/加入終濃度50 mM EDTA pH 8.0可使T4 RNA Ligase 1反應(yīng)終止。

 

組分信息

組分編號	組分名稱	14651ES80	14651ES90
14651-A	T4 RNA Ligase 1 (10 U/μL)	100 μL	500 μL
14651-B	10×T4 RL1 Reaction Buffer	200 μL	1 mL

 

儲存條件

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用說明

1. 單鏈RNA的環(huán)化連接反應(yīng)參考下表在冰浴中配制如下反應(yīng)體系

組分	使用量（μL）
10×T4 RL1 Reaction Buffer	2
1 mM ATP	1
單鏈RNA (20 μM)	0.5
PEG-8000 (50%)	8
T4 RNA Ligase 1 (10 U/μL)	1
DEPC水	Up to 20

2. 單鏈RNA或DNA的分子間連接反應(yīng)，參考下表在冰浴中配制如下反應(yīng)體系

組分	使用量（μL）
10×T4 RL1 Reaction Buffer	2
10 mM ATP	2
單鏈RNA (10 μM)	2
單鏈DNA (10 μM)	2
PEG-8000 (50%)	8
T4 RNA Ligase 1	2
DEPC水	Up to 20

3. 連接反應(yīng)：37℃孵育30 min*。

*如果發(fā)現(xiàn)效果欠佳可以適當(dāng)延長連接反應(yīng)時間或嘗試25℃孵育2 h或16℃孵育16 h。

4. 終止反應(yīng)：65℃孵育15 min或煮沸2 min，即可終止反應(yīng)。

 

注意事項

1. 本品連接的底物無論是單鏈RNA還是單鏈DNA，都需要確保5'末端磷酸化或腺苷酰化，同時3'末端是羥基。

2. 可根據(jù)具體應(yīng)用選擇合適的操作方法，需準(zhǔn)備額外的試劑，如RNase inhibitor、DEPC水等。

3. 根據(jù)連接反應(yīng)的類型，推薦在反應(yīng)體系中加入適量的PEG-8000。建議連接單鏈RNA或DNA的分之間連接反應(yīng)體系中PEG-8000的終濃度為15%-25%，這樣可以顯著提高酶活性，同時不影響反應(yīng)特性。

4. 本產(chǎn)品僅用作科研用途。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230419