Human BMP-4 ELISA Kit 人骨成型蛋白-4 ELISA試劑盒
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
人骨成型蛋白-4 (Human BMP-4)是9種結(jié)構(gòu)相關(guān)的BMP之一，屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）超家族。人BMP-4與小鼠BMP-4具有98%的序列一致性。成熟的BMP-4是一種二聚體，與具有絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的多聚體跨膜受體結(jié)合。BMP-4是一種體外和體內(nèi)軟骨生成的刺激因子，是軟骨再生的潛在治療劑。BMP-4的遞送可以通過(guò)刺激軟骨基質(zhì)成分II型膠原和聚集蛋白聚糖的合成來(lái)改善關(guān)節(jié)軟骨缺損的愈合過(guò)程。BMP-4也被證明可以抑制軟骨生成性肥大并維持再生軟骨。
翌圣Human BMP-4 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，用于定量測(cè)定血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中的BMP-4。特異性抗BMP-4抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本，經(jīng)過(guò)孵育，樣本中存在的BMP-4與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測(cè)抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中BMP-4的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(zhǎng)(參考波長(zhǎng)570 - 630 nm)測(cè)定吸光度值。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
97006ES48 / 97006ES96 |
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規(guī)格 |
48 T / 96 T |
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檢測(cè)范圍 |
15.63-1000 pg/mL |
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檢測(cè)方法 |
雙抗夾心法 |
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檢測(cè)時(shí)長(zhǎng) |
4.5小時(shí) |
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靈敏度 |
11.2 pg/mL |
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稀釋線性 |
86 - 127% |
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回收率 |
75 - 126% |
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板內(nèi)差 |
4.0% |
|
板間差 |
5.0% |
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
- 標(biāo)曲數(shù)據(jù)
- 靈敏度檢測(cè)
BMP-4的最低檢測(cè)限為11.2 pg/mL，通過(guò)使用重復(fù)檢測(cè)20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得出。
- 精密度檢測(cè)
酶標(biāo)板內(nèi)精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測(cè)定10次，評(píng)估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。
酶標(biāo)板間精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測(cè)30次，評(píng)估酶標(biāo)板間的精密度。
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項(xiàng)目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
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樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
10 |
10 |
10 |
30 |
30 |
30 |
|
|
平均值 |
423.6 |
120.5 |
56.2 |
410.8 |
118.6 |
56.6 |
|
標(biāo)準(zhǔn)差 |
18.7 |
3.2 |
2.8 |
29.5 |
3.4 |
2.8 |
|
變異系數(shù)（%） |
4.4 |
2.7 |
5.0 |
7.2 |
2.8 |
5.0 |
- 回收率檢測(cè)
通過(guò)不同水平的BMP-4添加于樣本中來(lái)測(cè)定回收率，其回收率如下:
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樣本類型 |
平均回收率(%) |
范圍（%） |
|
血清 |
94.6 |
74.8-117.8 |
|
血漿 |
111.5 |
89.6-124.4 |
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細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
114.6 |
107.6-126.7 |
- 稀釋線性檢測(cè)
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血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
108.3 |
97.2-127.2 |
|
1:04 |
116.7 |
115.1-118.2 |
|
1:08 |
114.8 |
114.6-115.1 |
|
1:16 |
111.5 |
109.3-112.7 |
|
血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
116.2 |
101.7-127.5 |
|
1:04 |
118.3 |
113.8-121.1 |
|
1:08 |
108.0 |
99.5-116.4 |
|
1:16 |
106.7 |
92.7-120.8 |
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細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
89.8 |
86.3-96.2 |
|
1:04 |
100.2 |
98.4-102.9 |
|
1:08 |
104.2 |
98.5-108.8 |
|
1:16 |
103.1 |
98.4-106.4 |
- 樣本值
應(yīng)用本試劑盒，檢測(cè)若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。
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樣本類型 |
樣本數(shù)目 |
平均值（pg/mL） |
樣本值（pg/mL） |
|
血清 |
6 |
n.d. |
n.d. |
|
血漿 |
12 |
8.9 |
n.d. -107.8 |
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細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
8 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測(cè)范圍內(nèi)得15.63 pg/mL
- 測(cè)定特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組BMP-4，沒(méi)有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。
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Recombinant human: |
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BMP-2 |
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BMP-5 |
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BMP-6 |
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BMP-7 |
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TGF-β1 |
檢測(cè)簡(jiǎn)圖
疑問(wèn)解答
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問(wèn)題 |
造成原因 |
解決方法 |
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標(biāo)曲不好 |
移液量不準(zhǔn)確 |
檢查移液器，按時(shí)校準(zhǔn)，仔細(xì)操作，充分混勻時(shí)蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
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稀釋方法不恰當(dāng) |
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顯色值偏低 |
孵育時(shí)間太短 |
給予足夠的孵育時(shí)間，樣本和溶解的標(biāo)準(zhǔn)品隔夜后更換。 |
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移液量不足或稀釋不當(dāng) |
校準(zhǔn)移液器和規(guī)范操作 |
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CV偏高 |
酶標(biāo)板清洗不當(dāng) |
使用正確的洗滌工序；如果使用洗板機(jī)，檢查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
準(zhǔn)備新鮮洗液 |
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靈敏度較低 |
試劑盒儲(chǔ)存不當(dāng) |
按照產(chǎn)品組分表進(jìn)行保存。 |
