NLS-Cas9-BPNLS Nuclease可以與引導(dǎo)RNA（guide RNA，gRNA）一起形成核糖核苷酸（RNP）復(fù)合物。使用RNP復(fù)合物進(jìn)行基因編輯已被證明可以減少其他CRISPR基因編輯技術(shù)所遇到的問題，如病毒和質(zhì)粒傳遞，脫靶效應(yīng)、細(xì)胞活力和轉(zhuǎn)錄/翻譯等。

NLS-Cas9-BPNLS Nuclease是一種無標(biāo)簽核酸酶，攜帶編碼化膿性鏈球菌Cas9基因的質(zhì)粒，N端雙粒子核定位信號(hào)（BPNLS），C端核蛋白核定位信號(hào)（核蛋白NLS），BPNLS和核漿蛋白NLS能夠顯著提高基因編輯效率。

 

該產(chǎn)品具有以下特點(diǎn)：

編輯效率高：在體外和體內(nèi)始終如一的高編輯效率。

無標(biāo)簽：不含額外的標(biāo)記氨基酸。

無脫氧核酸：無外部 DNA添加到系統(tǒng)中。

 

產(chǎn)品信息

貨號(hào)	11363ES50 / 11363ES60 / 11363ES76
規(guī)格	50 μg / 100 μg / 500 μg
來源	重組Cas9來源于大腸桿菌
物種	化膿性鏈球菌
標(biāo)簽	無標(biāo)簽
分子量	160 KDa
濃度	4 mg/mL
反應(yīng)溫度	37℃
溶劑	25 mM Tris、300 mM NaCl、0.1 mM EDTA， 50% 甘油， pH 8.0

 

組分信息

組分名稱	11363S50	11363S60	11363ES76
NLS-Cas9-BPNLS Nuclease	50 μg（4 mg/mL）	100 μg（4 mg/mL）	500 μg（4 mg/mL）

 

儲(chǔ)存條件

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用說明

體外DNA裂解實(shí)驗(yàn)推薦反應(yīng)體系

組分	20 μL反應(yīng)體系
10×Reaction Buffer	2 μL
Substrate DNA	2 μL（80 ng/μL）
NLS-Cas9-BPNLS Nuclease	2-4 μL（25 ng/μL）
sgRNA	2 μL（50 ng/μL）
Nuclease-free water	To 20 μL

注意：

1) 溶液應(yīng)充分混合，在37℃孵育1-2 h，然后加入1 μL的蛋白酶K（20 μg /μL），在55℃孵30 min孵育結(jié)束后，用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)消化效率。

2) 此反應(yīng)條件僅為推薦量，Cas9 : sgRNA的比例，一般建議1:2-1:5之間進(jìn)行摸索。

3) 設(shè)計(jì)3-6條sgRNA，篩選效率最高的sgRNA。

切割效率檢測(cè)示意圖：

按上表所述，20 μL的反應(yīng)體系，在含有線性化質(zhì)粒、gRNA 和Cas9的1×Cas9核酸酶反應(yīng)緩沖液中在37°C下反應(yīng)1小時(shí)，在瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定結(jié)果顯示，線性化質(zhì)粒的消化效率為98.28%，遠(yuǎn)高于90%。

 

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230321