產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
Hifair® Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA為模板進行多重定量PCR反應(yīng)的試劑盒。在實驗的過程中，逆轉(zhuǎn)錄和定量PCR在同一反應(yīng)管中進行，簡化了實驗操作，降低了污染的風(fēng)險。獨特的Buffer設(shè)計，在體系中不包含影響凍干工藝的化學(xué)試劑，可用于一步法RT-qPCR凍干反應(yīng)體系的配制和產(chǎn)品設(shè)計。
本試劑盒利用耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase進行定量擴增。本試劑盒主要包含優(yōu)化的凍干Buffer，Enzymes Mix等，緩沖液中已含有Mg2+和dNTP等，并添加了有效抑制非特異性PCR擴增的因子和提升多重qPCR反應(yīng)擴增效率的因子，能夠在保證引物擴增效率的同時，進行多重?zé)晒舛繑U增反應(yīng)。
產(chǎn)品組分
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組分編號 |
組分名稱 |
產(chǎn)品編號/規(guī)格 |
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13800ES60 (100 T) |
13800ES80 (1000 T) |
13800ES92 (10000 T) |
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13800-A |
4×Hifair® Lyo-Buffer |
625 μL |
6.25 mL |
62.5 mL |
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13800-B |
Hifair® Lyo-Enzyme Mix |
100 μL |
1 mL |
10 mL |
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13800-C |
DEPC-treated Water (DNase、RNase free) |
1.5 mL |
15 mL |
150 mL |
【注】1) 4×Hifair® Lyo-Buffer為Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的簡寫。
- Hifair® Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
適用機型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex，Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™，Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™，Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000，Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96，Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
運輸與保存方式
- 運輸方式：冰袋運輸。
- 保存方式：
Part 1： 13800-A【4×Hifair® Lyo-Buffer 】-20°C保存，有效期1年。
13800-C【DEPC-treated Water (DNase、RNase free)】-20°C保存，有效期1年。
Part 2： 13800-B【Hifair® Lyo-Enzyme Mix 】4°C保存，有效期6個月。
- 本品避免反復(fù)凍融。建議分裝保存。
注意事項
1. 實驗過程中請使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
反應(yīng)體系（以25 μL為例）
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組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
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4×Hifair® Lyo-Buffer |
6.25 |
1× |
|
Hifair® Lyo-Enzyme Mix |
1 |
- |
|
Primer Mix (10 μM) |
各0.4 |
0.16 μM |
|
Probe Mix (10 μM) |
各0.2 |
0.08 μM |
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模板RNA |
1-5 |
- |
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RNase Free H2O |
to 25 |
- |
【注】：使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
a) 引物濃度：Primer Mix中包含多對引物，通常每條引物終濃度可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM間進行調(diào)整。
b) 探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號的探針，每條探針的濃度可根據(jù)具體情況在50-300 nM間調(diào)整。
c) 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。
d) 反應(yīng)體系：推薦使用25 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復(fù)性。
e) 體系配制：請于超凈工作臺內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
標準擴增程序
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反應(yīng)階段 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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1 |
逆轉(zhuǎn)錄 |
50°Ca |
10 min |
1 |
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2 |
預(yù)變性 |
95°C |
5 min |
1 |
|
3 |
擴增反應(yīng) |
95°C |
|
45 |
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60°Cb |
30 secc |
【注】：
a) 逆轉(zhuǎn)錄：42°C或者50°C均可，時間 10-15 min。
b) 擴增反應(yīng)：擴增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計的引物Tm值進行調(diào)整。CDC官方推薦的ORF1ab和N引物，退火溫度建議≥60°C。
c) 熒光信號采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同，請根據(jù)最短時間限制進行設(shè)置。
HB211220
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