Hifair^® V Multiplex One Step RT-PCR Kit是以RNA為模板進(jìn)行多重PCR反應(yīng)的試劑盒。在實(shí)驗(yàn)的過程中，逆轉(zhuǎn)錄和PCR在同一反應(yīng)管中進(jìn)行，簡化了實(shí)驗(yàn)操作。

本試劑盒利用耐熱Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase進(jìn)行定量擴(kuò)增。本試劑盒主要包含優(yōu)化的MP Buffer、Enzymes Mix等，緩沖液中已含有Mg²⁺和dNTP等，并添加了有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增的因子和提升多重PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率的因子，能夠保證引物擴(kuò)增效率的同時(shí)，進(jìn)行多達(dá)八重的反應(yīng)。

 

產(chǎn)品組分

組分編號(hào)	組分名稱	產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
		13089ES50 （50T）	13089ES60 （100T）
13089-A	2×Hifair® V MP Buffer	500 μL	1 mL
13089-B	Hifair® V Enzyme Mix	75 μL	150 μL
13089-C	RNase Free H2O	500 μL	1 mL

【注】1) 2×Hifair^® V MP Buffer為Multiplex One Step RT-PCR Kit的簡寫。本組分含有dNTP和Mg²⁺和擴(kuò)增所需的離子。

2. Hifair^® V Enzyme Mix主要包含有耐熱Hifair^® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

 

運(yùn)輸與保存方式

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期1年。

 

注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)使用RNase free耗材。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作

反應(yīng)體系（以20 μL為例）

組分	體積（μL）	終濃度
2×Hifair® V MP Buffer	10	1×
Hifair® V Enzyme Mix	1.5	-
Primer Mix	x	0.1 μM -0.5 μM
模板 RNA	1 ng-100 ng	-
RNase Free H2O	to 20	-

【注】：使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。

1. 引物濃度：Primer Mix中包含多對(duì)引物，通常每條引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-0.5 μM間進(jìn)行調(diào)整。

b) 反應(yīng)體系：推薦使用20 μL以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。

c) 體系配制：請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。

 

標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增程序

	反應(yīng)階段	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
1	逆轉(zhuǎn)錄	50℃a	15 min	1
2	預(yù)變性	95℃	5 min	1
3	擴(kuò)增反應(yīng)	95℃	15 sec	35
		60℃b	5 min

【注】1）退火/延伸溫度可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求適當(dāng)調(diào)整

2.  退火/延伸的時(shí)間可根據(jù)擴(kuò)增長度進(jìn)行調(diào)整，擴(kuò)增速度1 kb/min  

 

HB200913