長片段逆轉(zhuǎn)錄酶Hifair? Ultra Reverse Transcriptase(200 U/μL)
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hifair® Ultra Reverse Transcriptase是對(duì)Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase進(jìn)行基因工程改造的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，該酶缺乏RNase H活性，合成全長cDNA的能力大幅提升，可擴(kuò)增長達(dá)20 kb的cDNA。Hifair® Ultra Reverse Transcriptase的熱穩(wěn)定性顯著提高，耐受溫度達(dá)65℃，可對(duì)具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板高效逆轉(zhuǎn)錄。與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，Hifair® Ultra Reverse Transcriptase具有更高的持續(xù)合成能力及合成速率，同時(shí)增強(qiáng)了耐抑制劑的能力，可有效解決樣品中的抑制劑導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄效率低下的問題。
產(chǎn)品組分
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編號(hào) |
組分 |
產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 |
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14604ES84 (2000 U) |
14604ES92 (10000 U) |
14604ES98 (200000 U) |
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14604-A |
Hifair® Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL) |
10 μL |
50 μL |
1 mL |
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14604-B |
5×Hifair® Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer |
50 μL |
250 μL |
5×1 mL |
產(chǎn)品應(yīng)用
全長cDNA文庫構(gòu)建；
終點(diǎn)法PCR；
RT-PCR及實(shí)時(shí)定量RT-PCR等。
運(yùn)輸與保存方法
干冰運(yùn)輸，-20ºC保存，有效期一年。
注意事項(xiàng)
1）請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈；操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩；實(shí)驗(yàn)所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染；
2）所有操作均應(yīng)在冰上進(jìn)行，防止發(fā)生RNA降解；
3）為保證逆轉(zhuǎn)錄成功，建議使用高質(zhì)量的RNA樣本；
4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
5）本產(chǎn)品僅用作科研用途！
第一鏈cDNA合成操作步驟
1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級(jí)結(jié)構(gòu)，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產(chǎn)量。）
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組分 |
使用量 |
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RNase free ddH2O |
to 13 μL |
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Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) |
1 μL |
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or 1 μL |
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or 1 μL |
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模板RNA |
Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:1 pg-500 ng |
65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應(yīng)液后加入下表中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，并用移液器輕輕吹打混勻。
2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液配制
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組分 |
使用量 |
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上一步的反應(yīng)液 |
13 μL |
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5×Hifair® Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer |
4 μL |
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dNTP Mix (10 mM) |
1 μL |
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Hifair® Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL) |
1 μL |
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RNase Inhibitor (40 U/µL) |
1 μL |
3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置
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溫度 |
時(shí)間 |
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25℃ |
5 min |
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50℃ |
15 min |
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85℃ |
5 min |
【注】：1）當(dāng)使用Random Primers時(shí)，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；
2）逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用50℃。對(duì)于高GC含量模板或者復(fù)雜模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高到55℃-60℃；
3）85℃加熱5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。
※ 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
HB221114
