產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
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E2 Select Ubiquitin Conjugation Kit重組人泛素結合酶篩選試劑盒 |
20440ES10 |
10 T |
產(chǎn)品簡介
泛素化是通過三個酶促步驟實現(xiàn)的。在ATP依賴的過程中，泛素激活酶(E1)催化與泛素形成活性硫酯鍵，然后轉移到泛素載體蛋白的活性位點半胱氨酸(E2)。泛素級聯(lián)對特定底物蛋白的選擇性依賴于E2結合酶(細胞中包含的相對較少)和泛素-蛋白連接酶(E3)之間的相互作用，迄今為止已經(jīng)鑒定出600多種這種酶。E3s是一個大的，多樣化的蛋白質組，其特征是幾個確定的基序之一。這些包括HECT(與e6相關蛋白c端同源)，RING(真正有趣的新基因)或U-box(沒有Zn2+結合配體的完整補充的修飾的RING基序)結構域。而HECT E3s在泛素化過程中具有直接的催化作用，RING和U-box E3s促進蛋白質泛素化。 后兩種E3類型充當適配器類分子。 它們使E2和底物足夠接近，從而促進底物的泛素化。雖然許多RING-type e3，如MDM2和c-Cbl，可以單獨發(fā)揮作用，但其他一些是作為更大的多蛋白復合體的組成部分，如后期促進復合體。綜上所述，這些多面的特性和相互作用使E3s能夠利用泛素-蛋白酶體系統(tǒng)，在真核生物的所有細胞中提供一種強大而具體的蛋白質清除機制。該篩選試劑盒集合了11種常用E2結合酶，可以篩選具有E3連接酶活性的蛋白所匹配的E2酶.
產(chǎn)品性質
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來源(Source) |
E.coli |
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分子量(Molecular Weight) |
Ubiquitin約10 kDa，E1酶大約116 kDa，E2s11種，E3酶大約102kDa,底物蛋白大約40.7kDa。 |
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外觀(Physical Appearance) |
泛素蛋白凍干粉，其他是液體； |
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標簽(Tag) |
None |
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純度(Purity) |
> 95% by SDS-PAG |
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儲存液(Stock) |
0.88 mg/ml (25 µM) in 50 mM HEPES pH 7.5, 200 mM NaCl, 10% Glycerol. |
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濃度(Concentration) |
見管外標簽 |
產(chǎn)品組分
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組分編號 |
組分名稱 |
規(guī)格 |
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20440-A |
10 × Reaction Buffer |
200 μL |
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20440-B |
10 × E1 Enzyme (His-tag) |
200 μL |
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20440-C |
5 × Ubiquitin （凍干粉中加 400μL 水） |
400 μL |
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20440-D |
10 × Mg2+ -ATP |
200 μL |
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20440-E |
10 × E3 Ligase Itch (Positive control) |
20 μL |
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20440-F |
20 × S5a substrate (Positive control) |
20 μL |
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20440-G |
20 × UBE2R1/UbcH3/Cdc34 (2R1) |
15 μL |
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20440-H |
20 × UBE2N/UBE2V2 Complex (2N/2V2) |
15 μL |
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20440-I |
20 ×UBE2D1/UbcH5a (D1） |
15 μL |
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20440-J |
20 × UBE2D2/UbcH5b (D2) |
15 μL |
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20440-K |
20 ×UBE2D3/UbcH5c (D3) |
15 μL |
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20440-L |
20 × UBE2L3/UbcH7 (2L3) |
15 μL |
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20440-M |
20 × UBE2K/E2-25K(2K) |
15 μL |
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20440-N |
20 × UBE2C/UbcH10(2C) |
15 μL |
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20440-O |
20 × UBE2H/UbcH2(2H) |
15 μL |
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20440-P |
20 × UBE2L6/UbcH8(2L6) |
15 μL |
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20440-Q |
20 × UBE2E1/UbcH6(E1) |
15 μL |
反應體系配制(20 μL)
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組分 |
體積 |
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ddH2O |
Up to 20 μL |
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10 × Reaction Buffer |
2 μL |
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10 × E1 Enzyme |
2 μL |
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5 × Ubiquitin |
4 μL |
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10 × ATP-Mg |
2 μL |
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20 × E2 Enzyme |
1 μL |
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E3 Ubiquitin Ligase* |
2 μL |
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Substrate(可選)* |
1 μL |
備注： *組分，使用者自己準備，E3 Ubiquitin Ligase 可重組表達或從細胞裂解液中純化，Substrate (可選) not required for analyzing E3 Auto-Ubiquitination.
陽性對照反應體系(20 μL)
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組分 |
體積 |
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ddH2O |
to 20 μL |
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10 × Reaction Buffer |
2 μL |
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10 × E1 Enzyme |
2 μL |
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5 × Ubiquitin |
4 μL |
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10 × ATP-Mg |
2 μL |
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20 × E2 Enzyme |
1 μL |
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10 × E3 Ligase Itch (Positive control) |
2 μL |
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20 × S5a substrate (Positive control) |
1 μL |
反應條件
37℃孵育(30min~2h，如果效果不明顯可增加反應時間12h)，建議使用PCR儀或金屬浴.
結果檢測
- 取樣品20 μL加入5 μL的5×SDS-PAGE Buffer，加熱樣品95 ℃ 5min，隨后使用還原性(含DTT)上樣緩沖液進行SDS-PAGE電泳分析；
- 選擇E3 Ubiquitin Ligase、泛素、Substrate抗體進行Western Blot分析.
儲存條件
-25~-15℃保存
注意事項
1. 避免反復凍融。
2. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20240227
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