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          Fluorimetric Pyrophosphate Assay Kit焦磷酸(PPi)熒光檢測(cè)試劑盒
           
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          產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
                  
          FAQ
                  
          COA
                  
          已發(fā)表文獻(xiàn)
                  
           
          產(chǎn)品信息
          


          
	
		
          
			
			
          產(chǎn)品名稱(chēng)
          
			          		
			
			
          產(chǎn)品編號(hào)
          
			          		
			
			
          規(guī)格
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          Fluorimetric Pyrophosphate Assay Kit焦磷酸(PPi)熒光檢測(cè)試劑盒
          
			          		
			
			
          50115ES70
          
			          		
			
			
          200 T
          
			          		
		
          
	          

          


           
          


          產(chǎn)品描述
          


          許多生化反應(yīng)，例如ATP水解、DNA和RNA聚合、腺苷酸環(huán)化酶形成的環(huán)AMP和脂肪酸的酶促活化以形成它們的輔酶A酯，都能產(chǎn)生焦磷酸鹽(PPi)，PPi能被無(wú)機(jī)焦磷酸酶水解。翌圣焦磷酸(PPi)熒光檢測(cè)試劑盒采用最可靠的焦磷酸鹽分光光度測(cè)定方法，使用專(zhuān)有的熒光PPi感受器(Ex/Em=316/456 nm)測(cè)定樣本PPi的含量，相對(duì)于傳統(tǒng)的酶偶聯(lián)方法更簡(jiǎn)單、更穩(wěn)定，是篩選酶活性或酶抑制劑的理想方法。
          


          該試劑盒已經(jīng)成功用于高通量篩選，適用于多種樣本，如：尿液、血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)提取物、組織裂解物等。
          


           
          


          產(chǎn)品組分
          


          
	
		
          
			
			
          組分編號(hào)
          
			          		
			
			
           組分名稱(chēng)
          
			          		
			
			
          組分規(guī)格
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          50115-A
          
			          		
			
			
          Assay  Buffer
          
			          		
			
			
          25 mL×1
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          50115-B
          
			          		
			
			
          PPi Sensor (Lyophilized)
          
			          		
			
			
          1 vial
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          50115-C
          
			          		
			
			
          Pyrophosphate Standard 
          
			          		
			
			
          1 mL×1, 50 mM
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          50115-D
          
			          		
			
			
          DMSO
          
			          		
			
			
          200 μL×1
          
			          		
		
          
	          

          


           
          


          運(yùn)輸和保存方法
          


          冰袋運(yùn)輸。-25~-15℃避光保存，有效期2年。
          


           
          


          注意事項(xiàng)
          


            
	
          1. 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
            2. 
	
          2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
            3. 
	
          3. 粉末溶解前請(qǐng)先短暫離心，以保證產(chǎn)品全在管底。
            4. 
	
          4. 請(qǐng)勿吸入、吞咽或者直接接觸皮膚和眼睛。
            5. 
	
          5. 本產(chǎn)品僅用于科研用途。
            6. 

          


           
          


          實(shí)驗(yàn)過(guò)程
          


          1、試劑準(zhǔn)備
          


          ① 200× PPi Sensor母液：將50 μL DMSO（D組分）加入PPi Sensor (Lyophilized)（B組分）中制備200× PPi Sensor母液，分裝-20°C避光保存，避免反復(fù)凍融。25 µL 200× PPi Sensor母液足以用于一塊96孔板。
          


          ② PPi標(biāo)準(zhǔn)液(1 mM)：向10 μL的50 mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（C組分）加入490 μL ddH2O或50 mM Hepes緩沖液(pH 7)，得到1 mM PPi標(biāo)準(zhǔn)溶液。
          


          ③ PPi標(biāo)準(zhǔn)液(PS7 - PS1)：向50 μL的1mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液加入450 μL ddH2O或50 mM Hepes緩沖液(pH 7)，得到100 μM PPi標(biāo)準(zhǔn)溶液(PS7)。取100 μM PPi標(biāo)準(zhǔn)溶液，用ddH2O或50 mM Hepes緩沖液(pH 7)進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋?zhuān)玫竭B續(xù)稀釋的焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品(PS6-PS1)。
          


          ④ PPi Sensor工作液：25 μL的200× PPi Sensor母液加入5 mL的Assay Buffer（組分A，用前恢復(fù)至室溫），充分混合以制備PPi工作液。
          


          【注】：由于該檢測(cè)方法對(duì)PPi具有高靈敏度，因此必須使用不含PPi的實(shí)驗(yàn)室器具和試劑。DTT ≥ 1 mM會(huì)增加背景，MgCl2 ≥ 2 mM會(huì)抑制反應(yīng)。
          


            
	
          1. 根據(jù)表1和2中提供的布局向黑色96孔板中加入50 μL PPi標(biāo)準(zhǔn)品(PS)、空白對(duì)照品(BL, Assay buffer only)或測(cè)試樣本(TS)。對(duì)于384孔板，每孔加入25 μL。
            2. 

          


          【注】：建議尿液樣品可考慮稀釋1-10倍，血清和血漿樣品可考慮稀釋2-20倍后再進(jìn)行檢測(cè)，具體稀釋倍數(shù)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況而定。
          


          Table 1. Layout of Pyrophosphate standards and test samples in a solid black 96-well microplate. 
          


          
	
		
          
			
			
          BL
          
			          		
			
			
          BL
          
			          		
			
			
          TS
          
			          		
			
			
          TS
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          PS1
          
			          		
			
			
          PS1
          
			          		
			
			
          …
          
			          		
			
			
          …
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          PS2
          
			          		
			
			
          PS2
          
			          		
			
			
           
          
			          		
			
			
           
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          PS3
          
			          		
			
			
          PS3
          
			          		
			
			
           
          
			          		
			
			
           
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          PS4
          
			          		
			
			
          PS4
          
			          		
			
			
           
          
			          		
			
			
           
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          PS5
          
			          		
			
			
          PS5
          
			          		
			
			
           
          
			          		
			
			
           
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          PS6
          
			          		
			
			
          PS6
          
			          		
			
			
           
          
			          		
			
			
           
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          PS7
          
			          		
			
			
          PS7
          
			          		
			
			
           
          
			          		
			
			
           
          
			          		
		
          
	          

          


          PS = Pyrophosphate Standard (PS1 - PS7, 0.13 to 100 µM), BL = Blank Control, TS = Test Sample.
          


           
          


          Table 2. Reagent composition for each well.
          


          
	
		
          
			
			
          Well
          
			          		
			
			
          Volume
          
			          		
			
			
          Reagent
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          PS1 - PS7
          
			          		
			
			
          50 μL
          
			          		
			
			
          Serial Dilutions (0.13 to 100 µM)
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          BL
          
			          		
			
			
          50 μL
          
			          		
			
			
          Assay Buffer
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          TS
          
			          		
			
			
          50 μL
          
			          		
			
			
          Test sample
          
			          		
		
          
	          

          


            
	
          1. 對(duì)于96孔板，每孔加入50 μL PPi Sensor工作液，總測(cè)定體積為100 μL/孔；對(duì)于384孔板，每孔加入25 μL PPi工作液，總測(cè)定體積為50 μL/孔。
            2. 
	
          2. 混勻后，室溫孵育10-30 min。
            3. 
	
          3. 熒光酶標(biāo)儀下測(cè)量熒光讀值，Ex/Em = 316/456 nm (Cutoff = 420 nm)。
            4. 

          


           
          


          數(shù)據(jù)分析
          


          從空白標(biāo)準(zhǔn)孔獲得的讀數(shù)用作陰性對(duì)照。從其他標(biāo)準(zhǔn)的讀數(shù)中減去該值，以獲得基線(xiàn)校正值。然后，繪制標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和方程。該方程可以用于計(jì)算樣本中PPi含量。
          


          【注】：熒光背景會(huì)隨時(shí)間而增加，因此標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣本的熒光讀值計(jì)算前需減去空白孔的熒光強(qiáng)度值。
          


          


          圖1 代表性PPi標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
          


           
          


           
          


          HB240402
          

             
           
           
           
           
           
           
           
          400-6111-883