產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
離子交換主要包括強陽離子交換、弱陽離子交換、強陰離子交換和弱陰離子交換4種，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的分離純化。
Magnify SP HP是一種強陽離子交換層析介質(zhì)，以表面接枝了葡聚糖的高剛性瓊脂糖為基架，具有高流速狀態(tài)下仍具有高的動態(tài)結(jié)合能力的優(yōu)點，可以很好的提高工業(yè)下游工藝的生產(chǎn)效率。且本品平均粒徑在40 μm左右，具有更高的比表面積，更高的載量和分辨率。本品離子交換基團-SO3–。
本品Magnify SP HP強陽離子交換預(yù)裝柱是Magnify SP HP強陽離子交換層析填料的中壓預(yù)裝柱，規(guī)格為5 mL，該預(yù)裝柱具有標準接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如ÄKTA等，方便客戶操作。
產(chǎn)品性質(zhì)
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基質(zhì) |
高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球 |
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平均粒徑 |
40 µm |
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離子交換類型 |
強陽離子 |
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載量 |
～0.20-0.24 mmol H+/mL 基質(zhì) |
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耐壓 |
0.3 MPa |
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推薦使用流速 |
≤300 cm/h |
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pH范圍 |
2-12（長期）/ 2-14（短期） |
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儲存緩沖液 |
20%乙醇，0.2M NaAc |
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柱子尺寸 |
1.6×2.5 cm（5 mL） |
運輸和保存方法
冰袋運輸。2-30℃保存，有效期2年。
使用方法
1 緩沖液的準備
應(yīng)選擇緩沖基團不與介質(zhì)作用的緩沖鹽，平衡緩沖液宜采用低鹽和低 pH（通常低于目的物等電點1個 pH 單位）緩沖液以有利于目的物的結(jié)合，同時需要考慮目的物在緩沖液中的穩(wěn)定性。洗脫緩沖液通常為在平衡緩沖液中加入高濃度鹽（如 1M NaCl）的緩沖液或高 pH 洗脫。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。
表1：陽離子交換緩沖液
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pH 范圍 |
緩沖鹽 |
濃度（mM） |
平衡離子 |
pKa(25℃) |
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1.4-2.4 |
Maleic acid |
20 |
Na+ |
1.92 |
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2.6-3.6 |
Methyl malonic acid |
20 |
Na+或 Li+ |
3.07 |
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2.6-3.6 |
Citric acid |
20 |
Na+ |
3.13 |
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3.3-4.3 |
Lactic acid |
50 |
Na+ |
3.86 |
|
3.3-4.3 |
Formic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
3.75 |
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3.7-4.7 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
4.21 |
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4.3-5.3 |
Acetic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
4.75 |
|
5.1-6.1 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
5.64 |
|
5.2-6.2 |
Methyl malonic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
5.76 |
|
5.6-6.6 |
MES |
50 |
Na+或 Li+ |
6.27 |
|
6.7-7.7 |
Phosphate |
50 |
Na+ |
7.20 |
|
7.0-8.0 |
HEPES |
50 |
Na+或 Li+ |
7.56 |
|
7.8-8.8 |
BICINE |
50 |
Cl- |
8.33 |
2 樣品準備
樣品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。
3 樣品純化
1）將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口，將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊。
2）用3-5倍柱體積的去離子水沖洗出存儲緩沖液。
3）使用至少5倍柱床體積的結(jié)合Buffer平衡色譜柱。
4）利用泵或注射器上樣。
【注】樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少也會導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進樣器更難使用。
5）用洗雜Buffer沖洗柱子，直到紫外吸收達到一個穩(wěn)定的基線（一般至少10-15個柱體積）。
6）用洗脫Buffer采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液就足夠了?？梢杂靡粋€小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來分離不同結(jié)合強度的蛋白質(zhì)。
5 填料清洗
離子交換填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高離子強度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱體積的Buffer進行平衡至離子強度或pH值穩(wěn)定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
離子交換填料可以重復(fù)使用而無需再生，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時可按照下面方法對填料進行清洗。
1）去除一些沉淀或變性物質(zhì)
用2倍柱體積的1 M NaOH溶液進行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)
用3-4倍柱體積的70%乙醇或3-4倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些離子鍵結(jié)合物質(zhì)
用3-4倍柱體積的2 M NaCl清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。
注意事項
1）請勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2）為了得到良好的分離效果，避免緩沖液與層析柱有太大溫差變化。
3）層析柱可以放在層析冷柜中使用，但是需要適當降低流速。
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5）本產(chǎn)品僅作科研用途！
附表 問題及解決方案
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問題 |
可能原因 |
推薦解決方案 |
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柱子反壓過高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分對填料進行清洗。 |
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樣品中含有微小的固體顆粒，建議使用前用0.22µm或0.45µm濾膜過濾。 |
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洗脫樣品較雜 |
填料重復(fù)多次使用 |
按照【填料清洗】部分對填料進行清洗或更換新填料。 |
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平衡不充分 |
增加平衡液體積，確保填料充分平衡/洗雜。 |
HB220708
