產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hifair® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以RNA為模板進(jìn)行多重定量PCR反應(yīng)的試劑盒。在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，逆轉(zhuǎn)錄和定量PCR在同一反應(yīng)管中進(jìn)行，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作，降低了污染的風(fēng)險(xiǎn)。
本試劑盒利用耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase進(jìn)行定量擴(kuò)增。本試劑盒主要包含優(yōu)化的 MP Buffer，Enzymes Mix 等，緩沖液中已含有Mg2+和 dNTP , 有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增的因子和提升多重qPCR反應(yīng)擴(kuò)增效率的因子，能夠在保證引物擴(kuò)增效率的同時(shí)，進(jìn)行多重?cái)U(kuò)增反應(yīng)。并添加了dUTP/UDG 系統(tǒng)，可有效防止氣溶膠污染的風(fēng)險(xiǎn)。
產(chǎn)品組分
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 |
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13894ES60 (100 T) |
13894ES80 (1000 T) |
13894ES92 (10000 T) |
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13894-A |
5×Hifair® V Universal MP Buffer |
600 μL |
6 mL |
60 mL |
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13894-B |
Hifair® V Universal Enzyme Mix |
120 μL |
1.2 mL |
12 mL |
【注】
a. 5×Hifair® V Universal MP Buffer 為Hifair® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的簡(jiǎn)寫。
b. Hifair® V Universal Enzyme Mix 主要包含有耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase、UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase和UDGase。
適用機(jī)型
Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20°C儲(chǔ)存，有效期12個(gè)月。本品避免反復(fù)凍融。建議分裝保存。
反應(yīng)體系
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組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
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5×Hifair® V Universal MP Buffer |
6 |
1x |
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Hifair® V Universal Enzyme Mix |
1.2 |
- |
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Primer/Probe Mixa |
x |
- |
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模板RNAb |
1-5 |
- |
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RNase Free H2O |
to 30 |
- |
【注】：使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過(guò)多氣泡。請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，并使用無(wú)核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍
頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
a. 引物探針混合液濃度：Primer/Probe Mix 中包含多對(duì)引物和探針，通常每條引物終濃度可以根據(jù)情況在 0.1-1.0 μM 間進(jìn)行調(diào)整；探針終濃度也可以根據(jù)對(duì)熒光曲線和熒光增峰的要求在 0.05-0.5 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。
b. 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進(jìn)行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。
擴(kuò)增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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逆轉(zhuǎn)錄 |
50℃ |
10 min |
1 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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擴(kuò)增反應(yīng) |
95℃ |
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40-45 |
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60℃a |
30 secb |
【注】：退火/延伸溫度可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求適當(dāng)調(diào)整。
a. 擴(kuò)增反應(yīng)：擴(kuò)增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計(jì)的引物Tm值進(jìn)行調(diào)整。
b. 熒光信號(hào)采集：不同的qPCR檢測(cè)儀器所需的熒光信號(hào)采集時(shí)間不同，請(qǐng)根據(jù)最短時(shí)間限制進(jìn)行設(shè)置。
注意事項(xiàng)
1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
HB220729
