產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
離子交換樹脂主要包括強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂、弱酸性陽離子交換樹脂、強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂和弱堿性陰離子交換樹脂4種，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的分離純化。
本品SP強(qiáng)陰離子交換樹脂以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖為介質(zhì)，小顆粒設(shè)計，高分辨率，多應(yīng)用樣品的精細(xì)純化。本品帶電基團(tuán)-SO3–。
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產(chǎn)品性質(zhì)
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基質(zhì)（Matrix） |
高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球 |
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粒徑（Bead size） |
25-45 µm |
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離子交換類型（Type） |
強(qiáng)陽離子 |
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載量（Capacity） |
0.15-0.20mmol H+/mL 介質(zhì) |
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流速（Flow Rate） |
≥150 cm/h |
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pH范圍（pH Range） |
4-13（長期）/ 3-14（短期） |
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儲存緩沖液（Buffer） |
20%乙醇，0.2M NaAc |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。2-8℃保存，有效期5年。
使用方法
1 緩沖液的準(zhǔn)備
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。下表為常用的陽離子交換緩沖液。
表1：陽離子交換緩沖液
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pH 范圍 |
緩沖鹽 |
濃度（mM） |
平衡離子 |
pKa(25℃) |
|
1.4-2.4 |
Maleic acid |
20 |
Na+ |
1.92 |
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2.6-3.6 |
Methyl malonic acid |
20 |
Na+或 Li+ |
3.07 |
|
2.6-3.6 |
Citric acid |
20 |
Na+ |
3.13 |
|
3.3-4.3 |
Lactic acid |
50 |
Na+ |
3.86 |
|
3.3-4.3 |
Formic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
3.75 |
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3.7-4.7 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
4.21 |
|
4.3-5.3 |
Acetic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
4.75 |
|
5.1-6.1 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
5.64 |
|
5.2-6.2 |
Methyl malonic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
5.76 |
|
5.6-6.6 |
MES |
50 |
Na+或 Li+ |
6.27 |
|
6.7-7.7 |
Phosphate |
50 |
Na+ |
7.20 |
|
7.0-8.0 |
HEPES |
50 |
Na+或 Li+ |
7.56 |
|
7.8-8.8 |
BICINE |
50 |
Cl- |
8.33 |
2 樣品準(zhǔn)備
樣品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。
3 樣品純化
1）將介質(zhì)裝入合適的層析柱，層析用5倍柱體積的結(jié)合Buffer進(jìn)行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。
2）將樣品加到平衡好的SP Agarose HP中（保證目的蛋白與填料充分接觸，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
3）用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。
4）使用5-10倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。
5）依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細(xì)菌污染。
4 填料清洗
離子交換樹脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高離子強(qiáng)度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱體積的Buffer 進(jìn)行平衡至離子強(qiáng)度或pH值穩(wěn)定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
離子交換樹脂可以重復(fù)使用而無需再生，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時可按照下面方法對樹脂進(jìn)行清洗。
1）去除一些沉淀或變性物質(zhì)
用2倍柱體積的1M NaOH 溶液進(jìn)行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)
用3-4倍柱體積的70%乙醇或3-4倍柱體積的1% Triton™ X-100 清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些離子鍵結(jié)合物質(zhì)
用3-4倍柱體積的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。
注意事項
1）請勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2）填料使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。
3）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5）本產(chǎn)品僅作科研用途！
附表 問題及解決方案
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問題 |
可能原因 |
推薦解決方案 |
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柱子反壓過高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分對樹脂進(jìn)行清洗。 |
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樣品中含有微小的固體顆粒，建議使用前用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。 |
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洗脫樣品較雜 |
樹脂重復(fù)多次使用 |
按照【填料清洗】部分對樹脂進(jìn)行清洗或更換新樹脂。 |
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平衡不充分 |
增加平衡液體積，確保樹脂充分平衡/洗雜。 |
HB220629
