產(chǎn)品描述

 

MolPure^® Magnetic Swab Viral DNA/RNA Kit可快速、高效地從拭子及病毒培養(yǎng)上清液中分離純化高純度的病毒DNA或RNA。采用獨特的磁珠及精心優(yōu)化的緩沖體系有效捕獲釋放的核酸，提取的病毒DNA或RNA純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，適用于各種下游應(yīng)用實驗，如PCR、熒光定量PCR等實驗。

 

產(chǎn)品組分

 

組分編號	組分名稱	18300ES50（50T）	18300ES60（100T）	18300ES70（200T）
18300-A	裂解緩沖液*	10 mL	20 mL	40 mL
18300-B	漂洗液*	15 mL	30 mL	60 mL
18300-C	洗滌液*	12 mL	24 mL	48 mL
18300-D	洗脫液	5 mL	10 mL	20 mL
18300-E	磁珠懸浮液	1 mL	2 × 1 mL	4× 1 mL
18300-F	Carrier RNA（來源于酵母）	310 µg	2× 310 µg	4× 310 µg
18300-G	RNase free H2O	0.5 mL	1 mL	2 mL

【注】：18300ES50裂解緩沖液*需加11 mL異丙醇，漂洗液*需加10.7 mL異丙醇，洗滌液*需加48 mL無水乙醇。

18300ES60裂解緩沖液*需加22 mL異丙醇，漂洗液*需加21.4 mL異丙醇，洗滌液*需加96 mL無水乙醇。

18300ES70裂解緩沖液*需加44 mL異丙醇，漂洗液*需加42.8 mL異丙醇，洗滌液*需加192 mL無水乙醇。

 

運(yùn)輸與保存方法

 

室溫運(yùn)輸，室溫保存，有效期12個月。

 

注意事項

 

注意觀察各溶液是否有析出或渾濁（尤其冬季等室溫為低溫環(huán)境時），避免影響使用效果。

使用前按照標(biāo)簽注明的體積加入相應(yīng)的異丙醇或無水乙醇。

3. 首次使用前，Carrier RNA（18300-F）先加入310 µL的RNase free H2O（18300-G）配制成1 µg/µL；可以根據(jù)用量情況進(jìn)行分裝，放置-20℃保存，避免Carrier RNA反復(fù)凍融，-20℃保存，有效期12個月。

4. 凍存樣本避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致樣本中DNA和RNA的質(zhì)量下降。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

 

實驗前準(zhǔn)備

 

自備設(shè)備和試劑：磁性分離架或自動化提取儀，水浴鍋或金屬浴，渦旋混勻儀，離心機(jī)，1.5 mL離心管等。

 

操作步驟

 

 

一、手工提取操作方法

1. 鼻拭子/咽拭子樣本處理方式：采集樣本，并與生理鹽水或病毒拭子保存液徹底顛倒或渦旋振蕩混勻；取200 µL液體轉(zhuǎn)移至1.5 mL無核酸酶離心管中。

注：不足200 µL時，需用拭子保存液或生理鹽水補(bǔ)足。

2. 加入400 µL裂解緩沖液*（確認(rèn)已加入異丙醇），6 µL Carrier RNA溶液，立即充分搖勻。

注：可根據(jù)樣本數(shù)量，在總共需要的裂解結(jié)合液中加入總共需要的Carrier RNA混勻備用，混合后每個樣本加入400 µL混合液，混合液可在4℃ 保存1小時，建議現(xiàn)用現(xiàn)配。

3. 加入20 µL磁珠懸浮液。

注：磁珠使用前需在渦旋混勻儀上充分重懸或充分顛倒混勻，在一次性加樣4-5次后，建議再次混勻后加樣。

4. 室溫（15-25℃）放置10 min，每隔2-3 min搖晃混勻1次。短暫離心收集管蓋與管壁的液體。

5. 將離心管放置于磁力架上靜置，磁珠完全吸附后，小心吸棄液體。

6. 向離心管中加入500 µL漂洗液*（確認(rèn)已加入異丙醇），搖勻后渦旋振蕩1 min。短暫離心收集管蓋與管壁的液體。

7. 將離心管放回磁力架上靜置，磁珠完全吸附后，小心吸棄液體。

8. 向離心管中加入500 µL洗滌液*（確認(rèn)已加入乙醇），搖勻后渦旋振蕩1 min。短暫離心收集管蓋與管壁的液體。

9. 將離心管放回磁力架上靜置，磁珠完全吸附后，小心吸棄液體。

10. 重復(fù)一遍步驟8和9。

11. 將離心管放置在磁力架上，開蓋56℃晾干3-5 min，以除去殘留的乙醇。

注：需確保乙醇揮發(fā)完全，但磁珠也不能過度干燥，干燥至磁珠剛出現(xiàn)龜裂即可。

12. 從磁力架上取下離心管，向離心管中加入50-100 µL洗脫液（推薦50 µL），振蕩混勻使磁珠分散，56℃放置2 min。短暫離心收集管蓋與管壁的液體。

13. 將離心管放回磁力架上靜置，磁珠完全吸附后，小心將液體轉(zhuǎn)移至新的無核酸酶的離心管中。

14. 溶液可置于-20℃短期保存，-80℃長期保存。

二、自動化提取操作方法

配套自動化儀器使用，以奧盛32 通道核酸提取儀器為例。

1. 按照下表向96孔深孔板中加入相應(yīng)試劑（樣本需平衡至室溫）：

列的名稱	位置	試劑名稱	用量/孔
樣品處理列	1/7列	樣本	200 µL
		裂解緩沖液*	400 µL
		Carrier RNA溶液	6 µL
漂洗列	2/8列	漂洗液*	500 µL
洗滌+磁珠列	3/9列	洗滌液*+磁珠懸浮液	500 µL+20 µL
洗滌列	4/10列	洗滌液*	500 µL
洗脫列	6/12列	洗脫液	70 µL

注：1）磁珠懸浮液使用前需在渦旋混勻儀上充分重懸或充分顛倒混勻，在一次性加樣4-5次后，建議再次混勻后加樣。

2）可以根據(jù)樣本數(shù)量，在總共需要的裂解緩沖液中加入總共需要的Carrier RNA混勻備用，混合液在4℃ 1 h內(nèi)穩(wěn)定。

2. 按照提取儀的位置，正確安放96孔板及磁棒套。

3. 按以下程序進(jìn)行自動化提取實驗。

4．自動化程序結(jié)束后，將第6、12列洗脫液轉(zhuǎn)移至干凈的無核酸酶離心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃長期保存。

奧盛32通道核酸提取儀器的提取程序

步驟	孔位	混合時間(min)	吸磁時間(sec)	等待時間(min)	容積(μL)	混合速度(1-10)	溫度(℃)	混合位置(0-100%)	混合幅度(1-100%)	吸磁位置(0-100%)	吸磁速度(1-10)
取磁珠	3	0.3	70	0	500	7	/	0	80	0	1
裂解結(jié)合	1	3	60	0	600	5	/	0	80	0	1
清洗1	2	1	40	0	500	7	/	0	80	0	1
清洗2	3	1	40	0	500	5	/	0	80	0	1
清洗3	4	1	40	1.5	500	5	/	0	80	0	1
洗脫	6	1.5	70	0	70	6	56	0	80	0	1
棄磁珠	3	0.3	0	0	500	7	/	0	80	0	1

注：“選項”中選擇“升溫動作同步”，磁吸方式選擇“分9段磁吸”。

 

HB20220224