Hieff? Quick exosome isolation kit Plus (for Milk) 乳液外泌體快速抽提試劑盒Plus
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中；Exosome攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息，不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。
本試劑盒采用獨(dú)特的分離技術(shù)，可以快速?gòu)?/font>乳液中獲得大量完整的外泌體顆粒，適用于下游的細(xì)胞共培養(yǎng)、電鏡分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測(cè)序等應(yīng)用。
組分信息
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
41209ES04 |
41209ES20 |
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41209-A |
Buffer-A |
10 mL |
50 mL |
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41209-B |
Buffer-B |
10 mL |
50 mL |
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41209-C |
Buffer-C |
10 mL |
50 mL |
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41209-D |
Buffer-D |
20 mL |
100 mL |
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41209-E |
50 mL過濾柱 |
4個(gè) |
20個(gè) |
儲(chǔ)存條件
室溫運(yùn)輸，本試劑盒可于室溫穩(wěn)定保存24個(gè)月。
使用說明
1.樣品制備：
1）收集新鮮的樣品，置于冰上待用；若為凍存的樣品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解凍，待完全融化后置于冰上待用。
2）取20 mL（最佳提取樣本量為50 mL）乳液樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，4℃，10,000×g離心20 min，轉(zhuǎn)移分層樣品中的中層乳清至新的離心管中。（離心后樣品分為三層，上層為脂質(zhì)層，中層為乳清層，下層為蛋白層。脂質(zhì)層應(yīng)致密、穩(wěn)定，若脂質(zhì)層松軟，不穩(wěn)定，且蛋白層沉淀較多，可重復(fù)此步驟。）。
3）向乳清中加入Buffer-A，顛倒混勻離心管至呈現(xiàn)半透明狀，再加入Buffer-B，顛倒混勻后2℃至8℃靜置10 min。（靜置結(jié)束后搖晃離心管，樣品應(yīng)呈現(xiàn)白色固體和透明液體混合物，若樣品仍為乳白色或是未呈現(xiàn)混合狀，可以適當(dāng)加入Buffer-B至液體透明）。
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乳清體積 |
Buffer-A |
Buffer-B |
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20 mL |
2 mL |
1.5 mL |
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40 mL |
4 mL |
3 mL |
【注】：試劑用量可根據(jù)此表進(jìn)行等比例換算。
4）將樣品于4℃，10,000×g離心10 min，收集上清液轉(zhuǎn)移至50 mL過濾柱中，4℃，3000×g離心2 min。
5）收集過濾后的上清液至新的離心管中，加入和Buffer-B等量的Buffer-C顛倒混勻。
2.外泌體分離：
1）向預(yù)處理后的樣品中，按照下表加入Buffer-D。
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預(yù)處理樣品量 |
Buffer-D |
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20 mL |
5 mL |
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40 mL |
10 mL |
【注】：試劑用量可根據(jù)此表進(jìn)行等比例換算。
2）蓋緊離心管蓋，渦旋振蕩1 min，再放置于2℃至8℃靜置1 h以上（注：增加靜置時(shí)間可提高外泌體得率，但不可超過24 h）。
- 取出裝有混合液的離心管，4℃，10,000×g離心60 min，棄上清（盡可能吸凈上清液），收集富含外泌體的沉淀。
- 將含有沉淀的離心管再次于4℃，10,000×g離心2 min，棄上清，收集沉淀（盡可能吸盡上清液）。
- 吸取一定量體積的1×PBS溶液均勻吹打離心沉淀物，待其充分懸浮于PBS后，將懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中。
【注】加入1×PBS的量，建議根據(jù)預(yù)處理樣本的體積決定，預(yù)處理樣本體積：Exosome Buffer體積=125:1。
6）將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃，12,000×g離心2 min，棄沉淀，保留上清液，該上清液即富含外泌體顆粒的溶液。
【注】此時(shí)如果依然可以看到明顯的沉淀，建議重復(fù)步驟6，多次離心至無明顯沉淀。
7）純化后的外泌體可于4℃保存3天，分裝后于-80℃長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融。
外泌體除菌（可選）：
獲得的外泌體后期需要與細(xì)胞共培養(yǎng)，可以使用0.22 μm的濾器進(jìn)行過濾除菌。初次嘗試時(shí)，建議外泌體蛋白濃度在10-100 μg/mL內(nèi)做梯度摸索，選擇一個(gè)較為合適的條件。
注意事項(xiàng)
1．如果想要進(jìn)一步純化外泌體，可以使用相應(yīng)抗體包被的磁珠進(jìn)行親和純化。
2．產(chǎn)品只針對(duì)乳液樣本，不適用其它血清/血液或者是細(xì)胞培養(yǎng)上清中外泌體的抽提；如果需要進(jìn)行細(xì)胞上清外泌體分離，請(qǐng)選用細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒。
3．為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
4．本產(chǎn)品僅作科研用途！
Ver.CN20230920
