酶切點位

5'-C↓CTAGG-3'

3'-GGATC↑C-5'

 

產品簡介

FuniCut™系列內切酶是通過基因工程重組技術，可在5~15 min內精確完成DNA切割的快速限制性內切酶，適用于快速切割質粒DNA、PCR產物、基因組DNA等。FuniCut™系列快速內切酶共用一種酶切緩沖液，從而簡化了酶切反應體系，另外，有良好的酶活冗余度，可輕松處理底物過量或困難模板的酶切。

 

產品信息

貨號	15002ES25
規(guī)格	25 T
識別位置	5'-C↓CTAGG-3' 3'-GGATC↑C-5'
推薦反應條件	1×FuniCut™ 緩沖液；最適37℃孵育
酶活	5 U/μL
失活條件	80℃孵育20 min
同裂酶	AspA2I, BlnI, XmaJI

 

組分信息

組分編號	組分名稱	15002ES25
15002-A	FuniCut™ AvrII	25 μL
15002-B	10×FuniCut™ Buffer	1 mL
15002-C	10×FuniCut™ Color Buffer*	1 mL

*10×FuniCut™ Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料，可將產物直接用于凝膠電泳。FuniCut™ Color Buffer的紅色染料與2500 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

 

儲存條件

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

注意事項

1. 3 h孵育未表現(xiàn)星號活性，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

3. 本產品僅作科研用途。

 

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 按如下建議的加樣順序配制體系反應液（冰上操作）

組分	質粒DNA	PCR產物	基因組DNA
ddH2O	15 μL	16 μL	30 μL
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer	2 μL	3 μL*	5 μL
底物DNA	2 μL (~1 μg)	10 μL (~0.2 μg)	10 μL (5 μg)
FuniCut™ AvrII	1 μL	1 μL	5 μL
Total	20 μL	30 μL	50 μL

*本體系指已純化后的PCR產物。未純化的PCR產物具備一定的離子強度，10×FuniCut^TM  Buffer加入量可適當減少至2 μL。若下一步進行克隆等實驗，酶切前需純化PCR產物。

2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴。

3) 37℃孵育15 min（質粒），或15~30 min（PCR產物），或30~60 min（基因組DNA）。

4) 80℃孵育20 min 即可使酶失活，停止反應（可選）。

5) 如果使用FuniCut™ Color Buffer進行酶切反應，得到的產物可直接上樣電泳。

2. 雙酶切或多酶切

1) 每種內切酶的用量為1 μL，并根據(jù)需要適當擴大反應體系。

2) 所有內切酶的體積總和不得超過總反應體系的1/10。

3) 如果選用的幾種內切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，以較高的溫度進行孵育。

3. 質粒的擴大反應體系

組分	體積（20 μL）	體積（20 μL）	體積（50 μL）*
DNA	1 μg	2 μg	5 μg
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer	2 μL	2 μL	5 μL
FuniCut™ AvrII	1 μL	2 μL	5 μL
Total	20 μL	20 μL	50 μL

*如果總反應體系大于20 μL，可使用水浴、金屬浴或沙浴，并增加孵育時間。

4. 不同DNA中的識別位點數(shù)

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
2	0	0	0	0	2	0	2

5. 甲基化修飾影響

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
無影響	無影響	無影響	無影響	無影響

6. 不同反應緩沖液中的活性*

反應緩沖液	FuniCut™ Buffer	Thermo Scientific FastDigest Buffer	NEB CutSmart® Buffer	Takara QuickCut™ Buffer
活性	100%	100%	100%	100%

*活性數(shù)據(jù)來自翌圣生物限制酶標準反應體系下的檢測。

 

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Ver.CN20230705