產(chǎn)品描述

 

eTET1 增強型DNA雙加氧酶是翌圣生物科技（上海）股份有限公司基于納氏蟲屬DNA雙加氧酶 (NgTET1）進行改造的重組融合突變體蛋白，具有更高的酶活性。eTET1可以將甲基化胞嘧啶 (5mC)經(jīng)過三步連續(xù)氧化反應(yīng)氧化成羧基化胞嘧啶 (5caC)。通過轉(zhuǎn)化劑的作用，5caC進一步被轉(zhuǎn)化成尿嘧啶 (U)，并通過PCR將尿嘧啶 (U)轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶 (T)，從而達(dá)到單堿基分辨率和高準(zhǔn)確性的DNA甲基化位點鑒定。

 

產(chǎn)品組分

 

 

運輸與保存方法 

 

干冰運輸。效期一年。-20°C保存，切不可搞錯！

 

注意事項

 

一、關(guān)于操作

1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2. 請于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后上下顛倒數(shù)次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。

3. 推薦在帶熱蓋的PCR儀中進行各步驟反應(yīng)，使用前應(yīng)預(yù)熱PCR儀至反應(yīng)溫度附近。

4. PCR產(chǎn)物因操作不當(dāng)極容易產(chǎn)生氣溶膠污染，進而影響實驗結(jié)果準(zhǔn)確性。推薦將PCR反應(yīng)體系配制區(qū)和PCR產(chǎn)物純化檢測區(qū)進行強制性的物理隔離；配備文庫構(gòu)建專用移液器等設(shè)備；定時對各實驗區(qū)域進行清潔（推薦使用ThermoFisher公司的DNAZap^TM高效核酸去除噴霧），以保證實驗環(huán)境的潔凈度。

5. 本產(chǎn)品僅用作科研用途！

二、應(yīng)用范圍

本試劑盒適用于DNA甲基化 (DNA 5mC)研究，針對的DNA投入量為1-200 ng，也提供了應(yīng)用于RNA甲基化 (RNA 5mC)的可能性。

三、關(guān)于試劑和操作注意事項

1. eTET1為二價金屬依賴性DNA雙加氧酶，因此對氧化體系中EDTA較為敏感。請不要用包含EDTA的緩沖液溶解DNA材料。若使用EDTA的緩沖液溶解DNA材料，我們建議進行一輪DNA回收進行純化，或者對eTET1 Enhancer的投入量進行重新滴定，以達(dá)到eTET1最佳的氧化效果。

2. eTET1 Enhancer的容易被氧化，收到后建議分裝保存于-20°C。短時間內(nèi)不用，建議-80°C保存。

 

使用方法

 

一、eTET1氧化甲基化胞嘧啶 (5mC)過程

 

圖1 eTET1氧化甲基化胞嘧啶 (5mC)過程

二、操作步驟（操作前請仔細(xì)閱讀操作注意事項）

1. 將表中試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用。配制eTET1氧化反應(yīng)體系：

名稱	體積 (μL)
DNA模板（不含EDTA，若含EDTA，見注意事項1）	24-25 (1-100 ng)
10× eTET1 Buffer	3
10× eTET1 Enhancer	1
eTET1 Enzyme Mix (5 mg/mL)	1-2
總共	30

2. 37°C反應(yīng)1.5 h。

3. eTET1活性（使用熒光抗體法對eTET1活性進行測定）

 

 

圖2 eTET1活性與其他TET酶活性比較

 

HB211124