產品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
Globin mRNA Depletion Probe (Human)是針對人的珠蛋白mRNA設計的探針，能夠有效去除成年個體、嬰兒及胚胎來源的珠蛋白mRNA，包括HBA1/2， HBB，HBD，HBM，HBG1/2，HBE1，HBQ1，HBZ。該產品搭配Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) (Yeasen#12257)使用，有效去除總RNA中的rRNA及Globin mRNA以保留其他信使RNA（mRNA）和非編碼RNA。該試劑盒對于完整和部分降解的總RNA均具有良好的rRNA去除效果。經rRNA & Globin mRNA去除所獲得的RNA樣本可用于高通量測序分析mRNA和非編碼RNA，可顯著提高測序結果中有效數(shù)據比例，也可用于cDNA合成或其它下游應用。
適用范圍
適用于人來源的100 ng~1 μg 總RNA樣品；適用于完整或部分降解RNA樣品。
產品組分
|
組分編號和名稱 |
12806ES08 |
12806ES24 |
12806ES96 |
|
|
8 μL |
24 μL |
96 μL |
運輸與保存方法
干冰運輸，-20°C存放，有效期一年。
注意事項
1. 請使用無RNase污染的耗材，并對實驗區(qū)域定期進行清理，推薦使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。
2. RNA樣品應不含基因組DNA污染，若樣品中有gDNA殘留，應先進行DNase I消化并純化后再用于本試劑盒。
3. RNA樣品最大投入體積為10 μL，若樣品體積較大，可先進行濃縮。
4.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5.本產品僅用作科研用途！
自備材料
1. RNA純化磁珠：Hieff NGS® Cleaner（Cat#12602）或其他等效產品。
2. qRT-PCR質檢rRNA去除效率：Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) （Cat#11201）或其他等效產品；
3. 其他材料： 無水乙醇、無菌超純水、低吸附槍頭、PCR管、磁力架、PCR儀等。
操作步驟
1. 探針雜交
1.1 將探針和雜交Buffer從-20 °C 取出，解凍后顛倒混勻，置于冰上備用。
1.2 準備RNA樣品：根據投入量和樣品濃度，計算RNA取樣體積，用Nuclease free H2O稀釋至10 μL。
1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反應體系。
表1 探針雜交反應體系
|
名稱 |
體積（μL） |
|
Hybridization Buffer |
3 |
|
Probe Mix(H/M/R) |
1 |
|
Globin Probe(Human) |
1 |
|
Total RNA |
10（100 ng~1 μg） |
|
Total |
15 |
1.4 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底。
1.5 將上述 PCR 管置于PCR儀中，按照表2所示反應程序，進行探針雜交反應。
表 2 探針雜交反應程序
|
溫度 |
時間 |
|
熱蓋105°C |
On |
|
95℃ |
2 min |
|
95℃-22℃ |
0.1℃/s |
|
22℃ |
5 min |
|
4℃ |
hold |
2. RNase H消化
2.1將RNase H消化試劑從-20 °C取出，解凍后顛倒混勻，置于冰上備用。按照表 3 所示，配制RNase H消化反應體系。
表3 RNase H消化反應體系
|
名稱 |
體積（μL） |
|
RNase H Buffer |
3 |
|
RNase H |
2 |
|
上步產物 |
15 |
|
Total |
20 |
注：RNase H Buffer及RNase H需單獨添加，若因樣本量較多需配置mix，請現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會影響去除效果。
2.2 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底。
2.3 將上述 PCR 管置于PCR儀中，設置反應程序：(熱蓋關) 37℃，30 min； 4℃，hold，進行RNase H消化反應。
3. DNase I 消化
3.1將DNase I消化試劑從-20 °C 取出，解凍后顛倒混勻，置于冰上備用。按照表4所示，配制DNase I消化反應體系。
表4 DNase I消化反應體系
|
名稱 |
體積（μL） |
|
DNase I Buffer |
27.5 |
|
DNase I |
2.5 |
|
上一步產物 |
20 |
|
Total |
50 |
3.2 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底。
3.3 將上述 PCR 管置于PCR儀中，設置反應程序：(熱蓋關) 37℃，30min； 4℃，hold，進行DNase I消化反應。
4. RNA純化
4.1 準備工作：將 Hieff NGS® RNA Cleaner （Cat#12602）磁珠由冰箱中取出，室溫平衡至少 30 min。用Nuclease free H2O配制 80%乙醇。
4.2 渦旋振蕩或充分顛倒磁珠以保證充分混勻。
4.3 吸取 110 μL Hieff NGS® RNA Cleaner（2.2×，Beads:DNA=2.2:1）至上一步產物中，移液器充分吹打混勻，室溫孵育 5 min。
4.4 將PCR管置于磁力架中分離磁珠和液體，待溶液澄清后（約3 min），小心移除上清。
4.5 保持PCR管始終置于磁力架中，加入 200 μL Nuclease free H2O新鮮配制的80%乙醇漂洗磁珠，室溫孵育 30 sec 后，小心移除上清。
4.6 重復步驟 4.5，總計漂洗兩次。用 10 μL移液器吸干凈殘留液體。
4.7 保持 PCR 管始終置于磁力架中，室溫下開蓋干燥磁珠（5~10 min）。
4.8 RNA洗脫：將PCR 管從磁力架上取下，加入 11 μL Nuclease free H2O（或使用適合下游實驗的相應體積Nuclease free H2O或洗脫緩沖液），使用移液器輕輕吹打至充分混勻，室溫靜置 5 min。
4.9將 PCR管短暫離心并置于磁力架中靜置，待溶液澄清后（約3 min），小心移取 10 μL 上清（可根據步驟4.8選擇的實際洗脫體積進行相應調整）至新的Nuclease free PCR 管中。
【注】洗脫后的樣品請立即進行下游實驗，或置于-80℃存放。
案例展示
Human Blood Total RNA分別進行rRNA去除、rRNA&Globin 去除后建庫測序，對比Globin mRNA含量。
相關產品
|
建庫試劑盒 |
產品編號 |
規(guī)格 |
|
Hieff NGS® Ultima DNA Library Prep Kit for Illumina® |
12199ES24/96 |
24/96 T |
|
Hieff NGS® MaxUpⅡ DNA Library Prep Kit for Illumina® |
12200ES24/96 |
24/96 T |
|
Hieff NGS® OnePot DNA Library Prep Kit for Illumina® |
12205ES24/96 |
24/96 T |
|
Hieff NGS® OnePotⅡ DNA Library Prep Kit for Illumina® |
12204ES24/96 |
24/96 T |
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Hieff NGS® Fast Tagment DNA Library Prep Kit for Illumina® |
12206/7ES24/96 |
24/96 T |
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Hieff NGS® MaxUpⅡ Dual-mode RNA Library Prep Kit |
12308ES24/96 |
24/96 T |
|
Hieff NGS® MaxUpⅡ Dual-mode mRNA Library Prep Kit |
12309ES24/96 |
24/96 T |
|
文庫構建磁珠 |
產品編號 |
規(guī)格 |
|
Hieff NGS® Smarter DNA Clean beads (>50 bp) |
12600ES08/56 |
5/60 mL |
|
Hieff NGS® DNA Selection Beads (Superior AMPure XP alternative) |
12601ES08/56 |
5/60 mL |
|
Hieff NGS® RNA Cleaner |
12602ES08/56 |
5/60 mL |
|
Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit |
12603ES24/96 |
24/96 T |
|
建庫接頭 |
產品編號 |
規(guī)格 |
|
Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina®, Set 1/2 |
12611/12612ES02 |
48×2 T |
|
Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina®, Set 1/2 |
12412/12413ES02 |
96×2 T |
|
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1/2 |
12615/12616ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3/4 |
12617/12618ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
Hieff NGS® Tagment Index Kit for Illumina®, (96 Index) |
12416ES96/384 |
96 T/384 T |
|
建庫模塊 |
產品編號 |
規(guī)格 |
|
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent |
12609ES24/96 |
24/96 T |
|
Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module |
12604ES24/96 |
24/96 T |
|
Hieff NGS® Ultima Endprep Mix |
12605ES24/96 |
24/96 T |
|
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module |
12607ES24/96 |
24/96 T |
|
Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module |
12608ES24/96 |
24/96 T |
|
2×Ultima Amplification Mix |
12620ES24/96 |
24/96 T |
|
2×Super Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix |
12621ES03/08 |
24/96 T |
|
Hieff NGS® Dual-Mode cDNA Synthesis Kit |
12250ES24/96 |
24/96 T |
|
Hieff NGS® FFPE DNA Repair Reagent |
12606ES24/96 |
24/96 T |
|
文庫定量 |
產品編號 |
規(guī)格 |
|
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix |
12302ES05 |
500 T |
|
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, DNA Standard (1-6) |
12307ES09 |
6×96 μL |
|
dsDNA HS Assay Kit for Qubit® |
12640ES60/76 |
100/500 T |
|
多重PCR定制咨詢 |
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|
NGS建庫原料酶咨詢 |
||
HB221111
