產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase是Hieff UNICON® Taq抗體（貨號：31301ES）和Hieff® Taq DNA Polymerase（貨號：10101ES）的混合產(chǎn)品。Hieff UNICON®Taq抗體與Hieff® Taq DNA Polymerase具有很高的親和力，高溫50℃處理30 min，依舊可以封閉Hieff® Taq DNA Polymerase的活性。本品在預(yù)變性溫度下加熱30 sec完全失活，釋放出DNA聚合酶活性。使用該熱啟動Taq酶可以有效抑制引物非特異性退火導(dǎo)致的擴增。
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase適用于熱啟動PCR和qPCR。本品中的Hieff® Taq DNA Polymerase是熱穩(wěn)定重組型DNA聚合酶，具有較高的模板親和力，非常適合低拷貝模板的擴增。擴增產(chǎn)物具有3′-dA，可輕松克隆T載體。
產(chǎn)品組分
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編號 |
組分 |
產(chǎn)品編號/規(guī)格 |
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10729ES72 (250 U) |
10729ES76 (500 U) |
10729ES80 (1000 U) |
10729ES92 (10000 U) |
10729ES93 (25000 U) |
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10729 |
HotStart Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
50 μL |
100 μL |
200 μL |
1 mL×2 |
1 mL×5 |
產(chǎn)品應(yīng)用
低拷貝基因擴增、基因型鑒定
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃，30 min內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位（U）。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期2年。
PCR反應(yīng)體系（50 μL）
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組分 |
體積 (μL) |
終濃度 |
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ddH2O |
to 50 |
- |
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2×Taq Buffer（含Mg2+、dNTP） |
25 |
1× |
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模板DNA |
X |
- |
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Forward primer (10 μM) |
2 |
0.4 μM |
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Reverse primer (10 μM) |
2 |
0.4 μM |
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Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
0.5 |
2.5 U/50 μL |
【注】：
1）試劑使用：各組分使用前需充分融化混勻。
2）聚合酶濃度：推薦使用2.5 U/50 μL。可以在1.25-5 U/50 μL之間進行優(yōu)化。
3）Mg2+終濃度：體系終濃度為2 mM。如有特殊需要，可用25 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應(yīng)體系）：
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模板種類 |
模板使用量 |
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基因組DNA |
50 ng-200 ng |
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質(zhì)粒DNA |
100 pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL (不超過反應(yīng)體系的1/10) |
PCR擴增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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預(yù)變性 |
95℃ |
1 min |
1 |
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變性 |
95℃ |
10 sec |
35-40 |
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退火 |
60℃ |
20 sec |
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延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
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終延伸 |
72℃ |
10 min |
1 |
【注】：
1）退火溫度和時間：溫度推薦使用50-60℃。退火溫度過低會導(dǎo)致非特異性擴增。引物設(shè)計參考熒光定量引物標準。推薦退火時間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。
2）延伸溫度和時間：溫度推薦使用72℃。時間推薦使用30 sec/kb。
3）擴增產(chǎn)物：請將PCR擴增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止DNA發(fā)生降解。
4）擴增程序：本產(chǎn)品用于定量實驗，可使用2步法程序擴增，去掉延伸步驟，退火和延伸合為一步，對應(yīng)的時間常用30 sec或根據(jù)儀器型號設(shè)置，如Applied Biosystems 7300需用31 sec以上。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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31301ES60/80/90/92/93/94 |
100 µg/ 1 mg/ 5 mg/ 10 mg/ 100 mg/ 1000 mg |
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11211ES03/09/61 |
1 mL/5 mL/100 mL |
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Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit |
11213ES60/80/92 |
100T/1000T /10000 T |
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Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus) |
11214ES60/80/92 |
100T/1000T /10000 T |
HB210917
