mRNA Cap 2氧甲基轉移酶（mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase）是一種來自于牛痘病毒的重組蛋白。該酶可以在RNA的5´末端緊挨帽結構的第一個核苷酸的2´-O位置處添加一個甲基基團。該酶利用SAM作為甲基供體來甲基化加帽RNA，從而形成Cap1結構。Cap1結構能增強mRNA的翻譯效率，因此可有助于改善mRNA轉染和顯微注射實驗中的表達。該酶需要有m7GpppN即7-甲基鳥苷帽結構的RNA作為底物。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

英文名（English Name）	mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase
來源（Source）	重組E.coli
濃度（Concertation）	50000 Units/mL
純度（Purity）	≥99%（SDS-PAGE）
比活（Specific Activity）	≥1.6×105 U/mg
儲存緩沖液（Storage Buffer）	20 mM Tris-HCl pH8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，100 mM NaCl，50%（v/v）甘油，0.1%（v/v）Trion X-100
活性單位定義（Unit Definition）	一單位（U）定義為：在37℃條件下1 h內(nèi)甲基化10 pmol的80 nt帶帽RNA轉錄物所需的酶量。

 

運輸和保存方法

冰袋運輸。-20℃保存，有效期1年。推薦分裝凍存，避免反復凍融。

 

產(chǎn)品組分

組分編號	組分名稱	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		10616ES84	10616ES92	10616ES97
10616-A	mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50 U/μL)	40 μL	200 μL	1 mL
10616-B	10×Capping Reaction Buffer	80 μL	400 μL	2 mL

 

使用方法

1、使用RNase-free 水將適量 Capped RNA 稀釋至16 μL；

2、將稀釋的RNA 在65℃條件下加熱處理5 min，反應后冰上放置 5 min；

3、按下表（1）配置反應體系（適用于10 μg以內(nèi)Capped RNA的甲基化反應）；

4、37℃條件下孵育1 h（對與目的片段長度小于200 nt RNA，可將孵育時間增加到2 h）；

表1：20μL反應體系配置

組分名稱	體積
Denatured Capped RNA	16 μL
10×Capping Reaction Buffer	2 μL
SAM (4 mM)	1 μL
mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50 U/μL)	1 μL

 

注意事項

1、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2、用于實驗反應的RNA在用之前應進行純化處理并溶于RNase-free water且溶液中不能含任何的EDTA和鹽離子；

3、反應之前推薦65℃加熱5 min以去除RNA的二級結構。如果轉錄產(chǎn)物的5´端結構復雜，可將時間延長至10 min；

4、本產(chǎn)品僅作科研用途！ 

HB220224