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          五代逆轉(zhuǎn)錄酶不含甘油Hifair? V Reverse Transcriptase(600 U/μL)
           
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          產(chǎn)品說明書
                  
          FAQ
                  
          COA
                  
          已發(fā)表文獻
                  
           
          產(chǎn)品簡介
          


           
          


          Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上通過基因工程技術(shù)得到的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其熱穩(wěn)定性大幅度提高，可耐受高達60℃的反應(yīng)溫度，適合具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。同時，該酶增強了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉(zhuǎn)錄。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全長cDNA的能力也有了提升，可擴增長達10 kb的cDNA。
          


           
          


          產(chǎn)品信息
          


           
          


          
	
		
          
			
			
          貨號
          
			          		
			
			
          11301ES06 / 11301ES12 / 11301ES62/ 11301ES75 /11301ES96
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          規(guī)格
          
			          		
			
			
          3 KU / 12 KU / 120 KU / 300 KU / 3000 KU 
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          單位定義
          
			          		
			
			
          以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內(nèi)，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個活性單位（U）。
          
			          		
		
          
	          

          


           
          


          組分信息
          


           
          


          
	
		
          
			
			
          組分名稱
          
			          		
			
			
          11301ES06
          
			          		
			
			
          11301ES12
          
			          		
			
			
          11301ES62
          
			          		
			
			
          11301ES75
          
			          		
			
			
          11301ES96
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL)
          
			          		
			
			
          5 μL
          
			          		
			
			
          20 μL
          
			          		
			
			
          200 μL
          
			          		
			
			
          500 μL
          
			          		
			
			
          5 mL
          
			          		
		
          
	          

          


           
          


          儲存條件
          


           
          


          2~8℃保存，有效期6個月。
          


           
          


          使用說明
          


           
          


          第一鏈cDNA合成操作步驟
          


          1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結(jié)構(gòu)，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產(chǎn)量。）
          


          
	
		
          
			
			
          組分
          
			          		
			
			
          使用量
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          RNase free ddH2O
          
			          		
			
			
          to 13 μL
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          Oligo (dT)18 (50 μM)
          

			
          or Random Primers (50 μM)
          

			
          or Gene Specific Primers (2 μM)
          
			          		
			
			
          1 μL
          

			
          or 1 μL
          

			
          or 1 μL
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          模板RNA
          
			          		
			
			
          Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng
          
			          		
		
          
	          

          


          65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應(yīng)液后，加入下表中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，并輕輕吹打混勻。
          


           
          


          2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（20 μL體系）
          


          
	
		
          
			
			
          組分
          
			          		
			
			
          使用量
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          上一步的反應(yīng)液
          
			          		
			
			
          13 μL
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          5×Hifair® V Buffer
          
			          		
			
			
          4 μL
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          dNTP Mix (10 mM)
          
			          		
			
			
          1 μL
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL)
          
			          		
			
			
          200 U
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          RNase inhibitor (40 U/µL)
          
			          		
			
			
          1 μL
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          RNase free ddH2O
          
			          		
			
			
          To 20 μL
          
			          		
		
          
	          

          


          3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置
          


          
	
		
          
			
			
          溫度
          
			          		
			
			
          時間
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          25℃*
          
			          		
			
			
          5 min
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          42℃**
          
			          		
			
			
          15-30 min
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          85℃***
          
			          		
			
			
          5 min
          
			          		
		
          
	          

          


          *當使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
          


          **逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至50-55℃。
          


          ***85℃加熱5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。
          


          逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
          


          該逆轉(zhuǎn)錄酶也適用于一步法RT-qPCR，推薦每25 μL反應(yīng)體系，添加10-20 U逆轉(zhuǎn)錄酶，也可根據(jù)實際情況逐步增加逆轉(zhuǎn)錄酶用量。
          


           
          


          注意事項
          


           
          


          1. 請保持實驗區(qū)域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染。
          


          2. 所有操作均應(yīng)在冰上進行，防止RNA降解。
          


          3. 為保證高效率逆轉(zhuǎn)錄，建議使用高質(zhì)量的RNA樣本。
          


          4. 本產(chǎn)品僅用作科研用途。
          


          5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
          


           
          


          Ver.CN20231116
          

             
           
           
           
           
           
           
           
          400-6111-883