本產(chǎn)品適用于多重PCR實(shí)驗(yàn)。2×Hieff NGS^® HG Multiplex PCR Master Mix 以熱啟動(dòng)多重PCR酶制劑 與 2×擴(kuò)增緩沖液為組分配置成預(yù)混液。本預(yù)混液可兼容GC含量在 25%-70%左右的多重基因擴(kuò)增，快速便捷地用于多重PCR反應(yīng)，具備高均一性、高特異性和高靈敏度的特點(diǎn)。本試劑適用于不同多重PCR需求， 可用于凝膠電泳鑒定20對(duì)以內(nèi)不同大小片段的多重產(chǎn)物，也可用于進(jìn)行數(shù)百重及以上擴(kuò)增子的富集。

 

組分信息

產(chǎn)品編號(hào)	組分名稱
13283	2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

 

儲(chǔ)存條件

2~8℃保存，有效期2年。

 

注意事項(xiàng)

1.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

2.本產(chǎn)品僅用作科研用途！

 

參考反應(yīng)體系

組分	體積（μL）	終濃度
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix	15	1×
Primer mix	x	0.1 μM-0.5 μM
模板 DNA	1 ng -400 ng	-
無(wú)菌超純水	up to 30	-

【注】:1）上表中 DNA 量和引物濃度均為推薦用量和濃度，可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行調(diào)整最適濃度。

2）參考建議：每條引物的濃度可在 0.1 μM-0.5 μM 范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。

3）預(yù)混液中已經(jīng)包含擴(kuò)增所需要的酶、dNTP、鹽離子等，無(wú)需額外添加。

第一輪擴(kuò)增程序

循環(huán)步驟	溫度（℃）	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95℃	3 min	1
變性	95℃	20 sec	15-45
退火延伸	60℃	4-10 min
終延伸	72℃	5 min	1

【注】:在 PCR 儀上設(shè)置上表中的反應(yīng)程序進(jìn)行多重 PCR 反應(yīng)（設(shè)置熱蓋溫度至 105℃左右）。 退火延伸時(shí)間：100 重 PCR 推薦 4 min；1000 重推薦 8-10 min 需要自己根據(jù)引物情況摸索。

PCR 產(chǎn)物磁珠純化: 建議在 30 μL 反應(yīng)體系中加 27μL 磁珠（Cat:12601）進(jìn)行產(chǎn)物純化。

第二輪擴(kuò)增程序

循環(huán)步驟	溫度（℃）	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95℃	3 min	1
變性	95℃	20 sec	15-45
退火	60℃	1 min
延伸	72℃	30 sec
終延伸	72℃	5 min	1

【注】:退火溫度和時(shí)間上推薦使用60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時(shí)間設(shè)置為1 min，可以在30 s-1 min 內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時(shí)間太長(zhǎng)可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。

PCR 產(chǎn)物磁珠純化: 建議在 30 μL 反應(yīng)體系中加 27μL 磁珠（Cat:12601）進(jìn)行產(chǎn)物純化。

 

Ver.CN20230816