產(chǎn)品說明書
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已發(fā)表文獻
產(chǎn)品簡介
RNase 抑制劑 (RNase inhibitor) 是存在于人的胎盤中一種特異性核糖核酸酶 (RNase) 抑制劑，其特異性失活 RNase 的原理是：與 RNase 以非共價鍵結(jié)合形成復(fù)合體，造成 RNase 失活。
本產(chǎn)品是以可溶形式在大腸桿菌中表達純化的重組鼠源 RNase 抑制劑，能夠廣泛抑制各種類型 RNase (RNase A, B, C)。 經(jīng) RT-PCR、RT-qPCR 檢驗，本產(chǎn)品能與各種逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA 聚合酶兼容。與人源 RNase inhibitor 相比，本產(chǎn)品不含人源蛋白中的兩個對氧化非常敏感的半胱氨酸，因而具有更高的抗氧化活性。同時，更加適合于對高 DTT 敏感性實驗，如 qPCR 等。
與 Murine RNase Inhibitor (40 U/µL) 鼠源 RNase 抑制劑 (Cat#10603ES) 相比，本品經(jīng)過翌圣生物 UCF.ME®超低殘留工藝處理，產(chǎn)品中核酸酶、宿主gDNA等殘留更低，適合對背景菌要求更為嚴(yán)格、性能要求更高的應(yīng)用場景，如支持引物探針提前預(yù)混的熒光定量PCR體系的開發(fā)等。
產(chǎn)品信息
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貨號 |
14676ES05 / 14676ES10 / 14676ES20 / 14676ES50 / 14676ES60 / 14676ES70 |
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規(guī)格 |
2 KU / 10 KU / 20 KU / 40 KU / 100 KU / 400 KU |
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活性定義 |
抑制5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定義為1 U。RNase A活性通過水解Cyclic 2’,3’-CMP生成3’-CMP定量求得。 |
組分信息
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組分編號 |
組分名稱 |
14676ES05 (2 KU) |
14676ES10 (10 KU) |
14676ES20 (20 KU) |
14676ES50 (40 KU) |
14676ES60 (100 KU) |
14676ES70 (400 KU) |
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14676 |
UCF.ME® Advanced Murine RNase Inhibitor (40 U/µL) |
50 μL |
250 μL |
500 μL |
1 mL |
2.5 mL |
10 mL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說明
- 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（20 μL體系）
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組分 |
使用量 |
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5×RT Buffer |
4 μL |
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dNTP Mix (10 mM) |
1 μL |
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Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL) |
1 μL |
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UCF.ME® Advanced Murine RNase Inhibitor (40 U/µL) |
1 μL |
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RNase free ddH2O |
To 20 μL |
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模板RNA |
Total RNA:1 ng-5 μg |
- 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置
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溫度 |
時間 |
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25℃* |
5 min |
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42℃** |
15-30 min |
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85℃*** |
5 min |
*當(dāng)使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
**逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至50-60℃。
***85℃加熱5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。
- 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
- 適用機型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR; SLAN 96S, 96P.
注意事項
1. 本品抑制 RNase 活性的 pH 值范圍較廣，在 pH 7-8 時表現(xiàn)最大活性。
2. 避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作，以防止本品失活。
3. 本品不抑制 RNase H 活性。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20241119
