產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上通過基因工程技術(shù)得到的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其速度和穩(wěn)定性大幅度提高。此外，該產(chǎn)品經(jīng)過翌圣生物特別研發(fā)的精制工藝處理，產(chǎn)品中核酸酶、宿主gDNA以及其他背景菌gDNA殘留極低，適用于快速全預(yù)混RT-qPCR試劑開發(fā)。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號(hào)	14614ES92 / 14614ES97 / 14614ES98
規(guī)格	10 KU / 100 KU / 200 KU
單位定義	以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內(nèi)，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位（U）。

 

組分信息

 

組分名稱	14614ES92	14614ES97	14614ES98
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL)	50 μL	500 μL	1 mL

 

儲(chǔ)存條件

 

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用說明

 

1.兩步法RT-PCR/qPCR（第一鏈cDNA合成）

1）RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級(jí)結(jié)構(gòu)，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產(chǎn)量。）

組分	使用量
RNase free ddH2O	to 13 μL
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM)	1 μL or 1 μL or 1 μL
模板RNA	Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng

65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡(jiǎn)短離心收集反應(yīng)液后，加入下表中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，并輕輕吹打混勻。

2）逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（20 μL體系）

組分	使用量
上一步的反應(yīng)液	13 μL
5×RT Buffer	4 μL
dNTP Mix (10 mM)	1 μL
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL)	200 U
RNase inhibitor (40 U/µL)	1 μL
RNase free ddH2O	To 20 μL

3）逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置

溫度	時(shí)間
25℃*	5 min
42℃**	15-30 min
85℃***	5 min

*當(dāng)使用Random Primers時(shí)，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。

**逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用42℃。對(duì)于高GC含量模板或者復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至50-60℃。

***85℃加熱5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。

4）逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)，也可-20℃短期保存，若需長(zhǎng)期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

 

2.一步法RT-PCR/qPCR

該逆轉(zhuǎn)錄酶適用于一步法RT-PCR/qPCR，推薦每25 μL反應(yīng)體系，添加10-40 U逆轉(zhuǎn)錄酶，最適逆轉(zhuǎn)錄條件為50℃ 15min，也可根據(jù)實(shí)際情況逐步增加逆轉(zhuǎn)錄酶用量，多重體系建議提高酶量。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈；操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩；實(shí)驗(yàn)所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染。

2. 所有操作均應(yīng)在冰上進(jìn)行，防止RNA降解。

3. 為保證高效率逆轉(zhuǎn)錄，建議使用高質(zhì)量的RNA樣本。

4. 本產(chǎn)品僅用作科研用途。

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20241104