超潔凈高穩(wěn)定性Taq DNA聚合酶Hieff UNICON UCF. ME? Advanced Hotstart Taq DNA Polymerase （20 U/μL）
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本產(chǎn)品是一款采用公司自主研制的雙抗體進(jìn)行雙封閉的熱啟動(dòng)DNA聚合酶，不僅封閉了Taq DNA聚合酶5'→3'聚合酶活性，同時(shí)也封閉了5'→3'核酸外切酶活性。在預(yù)變性溫度下加熱30 sec封閉抗體即可完全失活，釋放出 DNA 聚合酶活性和核酸外切酶活性。雙封閉特性不僅能有效防止錯(cuò)配或引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增，又能有效抑制探針降解產(chǎn)生的熒光信號(hào)下降，雙重保障使體外檢測(cè)試劑在運(yùn)輸或室溫使用過程中更加穩(wěn)定。
此外，該產(chǎn)品經(jīng)過翌圣生物 UCF.ME®超低殘留工藝處理，產(chǎn)品中核酸酶、宿主gDNA等殘留極低，搭配優(yōu)化的緩沖體系（如 Cat#16716ES），可有效減少混樣、體系升溫階段以及長期儲(chǔ)存過程中引物探針互搭引起的非特異性擴(kuò)增，支持引物探針提前預(yù)混的熒光定量PCR體系的開發(fā)。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
14321ES76 / 14321ES80 / 14321ES92 / 14321ES93 |
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規(guī)格 |
1000 U / 10000 U / 25000 U / 100000 U |
組分信息
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
14321ES76 (1000 U) |
14321ES80 (10000 U) |
14321ES92 (25000 U) |
14321ES93 (100000 U) |
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14321 |
UCF.ME® Advanced Hotstart Taq (20 U/μL) |
50 μL |
500 μL |
1.25 mL |
5 mL |
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存，有效期2年。
使用說明
- 反應(yīng)體系（以25 μL和50 μL為例）
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貨號(hào) |
組分名稱 |
體積（μL） |
體積（μL） |
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16716-A |
5× PCR Buffer |
5 |
10 |
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16716-B |
MgCl2（250 mM） |
0.35 |
0.7 |
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16716-C |
dNTP Mix（25 mM each） |
0.25 |
0.5 |
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14321 |
UCF.ME® Advanced Hotstart Taq (20 U/μL) |
0.15 |
0.3 |
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/ |
Primer(10 μM) |
0.4 |
0.8 |
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/ |
Probe Mix (10 μM) |
0.2 |
0.4 |
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/ |
模板 DNA |
1-20 |
1-30 |
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/ |
RNase Free H2O |
to 25μL |
to 50 μL |
【注】使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
a). dNTP濃度：建議dNTP終濃度為0.2 - 0.5 mM，如有特殊需求，可用25 mM each dNTP Mix以0.05 - 0.1 mM為間隔上下摸索dNTP的最佳使用濃度。
b). MgCl2濃度： 建議Mg 2+終濃度為1.5 - 5 mM，如有特殊需求，可用250 mM MgCl2以0.2 - 0.5 mM為間隔上下摸索Mg 2+的最佳使用濃度。
c). 引物濃度：Primer Mix 中包含多對(duì)引物，通常每條引物終濃度可以根據(jù)情況在 0.1-1.0 μM 間進(jìn)行調(diào)整。
d). 探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號(hào)的探針，每條探針的濃度可根據(jù)具體情況在50-300 nM間調(diào)整。
e). 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進(jìn)行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。
f). 反應(yīng)體系：推薦使用25 μL或50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。
g). 體系配制：請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭；避免交叉污染和氣溶膠污染。
- 參考擴(kuò)增程序
2.1 標(biāo)準(zhǔn)程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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變性 退火/延伸 |
95℃ |
|
45 |
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60℃a |
30 secb |
【注】a. 擴(kuò)增反應(yīng)：擴(kuò)增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計(jì)的引物Tm值進(jìn)行調(diào)整。
b. 熒光信號(hào)采集：不同的qPCR檢測(cè)儀器所需的熒光信號(hào)采集時(shí)間不同，請(qǐng)根據(jù)最短時(shí)間限制進(jìn)行設(shè)置。
2.2 快速程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
|
預(yù)變性 |
95℃ |
30 sec |
1 |
|
變性 退火/延伸 |
95℃ |
|
45 |
|
60℃ |
20 secc |
【注】c. 快速程序：實(shí)際使用的qPCR檢測(cè)儀器是否支持快速擴(kuò)增，請(qǐng)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。
- 適用機(jī)型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR; SLAN 96S, 96P.
注意事項(xiàng)
1. 實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20241119
