產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

本試劑盒通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定樣本中載脂蛋白B（ApoB）的濃度。首先，將樣本加入到預(yù)先涂有特異性抗體的酶標(biāo)孔中，隨后加入生物素標(biāo)記的抗原。在37℃下孵育30 min，樣本中的ApoB抗原與生物素標(biāo)記的抗原會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合固相抗體，形成免疫復(fù)合物。孵育完成后，用PBST緩沖液洗滌，去除未結(jié)合的生物素標(biāo)記抗原。接著加入親和素-辣根過(guò)氧化物酶（HRP）復(fù)合物，再次在37℃孵育30 min，使親和素-HRP與生物素標(biāo)記的抗原結(jié)合。洗滌后，加入四甲基聯(lián)苯胺（TMB）底物，結(jié)合的HRP會(huì)催化TMB顯色，呈現(xiàn)藍(lán)色。在酸的作用下，藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，該黃色產(chǎn)物在450 nm波長(zhǎng)處有吸收峰。最終，通過(guò)測(cè)定吸光值來(lái)反映樣本中ApoB的濃度，吸光值與ApoB濃度呈負(fù)相關(guān)。

翌圣生物提供大鼠載脂蛋白B(ApoB)ELISA試劑盒（60411ES）、小鼠載脂蛋白B(ApoB)ELISA試劑盒（60412ES）和人載脂蛋白B(ApoB)ELISA試劑盒（60413ES）。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號(hào)	60412ES48/60412ES59
規(guī)格	48 T/96 T
檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)	1.5 h
檢測(cè)范圍	2μg/mL–600μg/mL
板內(nèi)差	小于10%
板間差	小于12%

 

組分信息

 

組分編號(hào)	組分名稱	48 T	96 T	儲(chǔ)存條件	備注
60412ES-A	酶標(biāo)板	1×48	1×96	-25～-15℃	Part1
60412ES-B	標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉)	2支(1支加150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液溶解)	2支(1支加150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液溶解)	2～8℃	Part2
60412ES-C	標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液(0.05 M的PBS)	3 mL	6 mL	2～8℃
60412ES-D	濃縮生物素抗原(凍干粉)	1支	1支	-25～-15℃	Part1
60412ES-E	濃縮親和素-HRP	50 μL	100 μL	-25～-15℃	Part1
60412ES-F	生物素抗原稀釋液	3 mL	6 mL	2～8℃	Part2
60412ES-G	親和素-HRP稀釋液	2.9 mL	5.9 mL	2～8℃
60412ES-H	顯色劑A液	3 mL	6 mL	2～8℃
60412ES-I	顯色劑B液	3 mL	6 mL	2～8℃
60412ES-J	終止液(2 M的H2SO4，需小心開(kāi)啟)	3 mL	6 mL	2～8℃
60412ES-K	濃縮洗滌液(含0.15% 吐溫-20的PBST)	20 mL(25X)	20 mL(25X)	2～8℃
60412ES-L	封板膜	2片（48）	2片（96）	2～8℃
60412ES-M	密封袋	1個(gè)	1個(gè)	2～8℃

備注：

1. 濃縮洗滌液在低溫下會(huì)有少量鹽類(lèi)析出，稍微加溫后即會(huì)消失，不影響使用。
2. 酶標(biāo)板為真空包裝，板條可以拆卸，拆開(kāi)以后如一次不能用完，可放入提供的密封袋中，放入干燥劑，2～8℃保存，在一個(gè)月之內(nèi)仍然有效。
3. 試劑不能反復(fù)凍融。

 

儲(chǔ)存條件

 

2～8℃保存，有效期6個(gè)月。

 

使用說(shuō)明

 

1.試劑準(zhǔn)備

1）使用前所有試劑應(yīng)置于室溫平衡至少30 min。

2）本試劑盒可以直接加樣，如濃度過(guò)高，可以進(jìn)行適當(dāng)比例的稀釋?zhuān)?jì)算時(shí)應(yīng)將結(jié)果乘以稀釋的倍數(shù)，建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)(以樣本測(cè)定值在標(biāo)曲范圍內(nèi)為準(zhǔn))。

3）洗滌液為25倍濃縮液，使用前需將所有洗滌液倒入500 mL或1 L的燒杯中，用雙蒸水定容到500 mL即為工作液，或可按比例1:24配制需要量。

4) 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)好恐?biāo)準(zhǔn)品加150 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液到標(biāo)準(zhǔn)品干粉管中，然后漩渦混勻30s，充分溶解，避免氣泡，即為800μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品原液(24h內(nèi)用完)。取5支干凈的EP管，每管加120μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，分別標(biāo)記上400μg/mL，200μg/mL，100μg/mL，50μg/mL，25μg/mL。取120μL標(biāo)準(zhǔn)品原液加入標(biāo)記400μg/mL的管中，混勻后同樣取出120μL，加入下一管，以此類(lèi)推直至最后一管。

5) 生物素抗原的稀釋?zhuān)簩饪s生物素抗原(凍干粉)低速(2000-4000轉(zhuǎn)/分鐘)離心(2-5 min)，然后抽取生物素抗原稀釋液1 mL到濃縮型生物素抗原(凍干粉)中，漩渦混勻15s，至凍干粉完全溶解，然后將所有液體倒入稀釋液瓶中，漩渦混勻后即為生物素抗原工作液(一周內(nèi)用完)。

6) 親和素-HRP的稀釋?zhuān)簩⒂H和素-HRP低速(2000-4000轉(zhuǎn)/分鐘)離心(2-5 min)，使?jié)饪s液全部沉到管底，將濃縮親和素-HRP全部轉(zhuǎn)移到稀釋液瓶中，漩渦混勻后即為親和素-HRP工作液(一周內(nèi)用完)。

2.樣本前處理

標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-25～-15℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

1）血清

室溫血液自然凝固10-20 min，2000-3000轉(zhuǎn)/分，離心20 min左右。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2）血漿

根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20 min后，2000-3000轉(zhuǎn)/分，離心20 min左右。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3）尿液

用無(wú)菌管收集，2000-3000轉(zhuǎn)/分，離心20 min左右。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4）細(xì)胞培養(yǎng)上清

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。2000-3000轉(zhuǎn)/分，離心20 min左右。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS (pH 7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/mL左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2000-3000轉(zhuǎn)/分，離心20 min左右。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2～8℃的溫度。按重量體積比1 g:9 mL的比例加入9倍體積的PBS(pH7.4，41403ES)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2000-3000轉(zhuǎn)/分，離心20 min左右。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

3.洗板方法

1) 手工洗板：先甩洗去酶標(biāo)孔中的的液體，倒扣在吸水紙上拍干，然后每孔加入300 μL稀釋好的洗滌液，輕輕搖晃30s，然后甩掉，在吸水紙上拍干，重復(fù)4-5次。

2) 洗板機(jī)洗板：洗板機(jī)洗板比較便捷，但應(yīng)操作熟練后使用。

4.詳細(xì)操作程序

1) 使用前將試劑盒在室溫下平衡半小時(shí)。

2) 空白孔：空著先不加（只在最后和其它孔一起加顯色劑A、B和終止液用于調(diào)零)。

3) 標(biāo)準(zhǔn)品孔：每孔加入稀釋好各濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μL，然后加入生物素抗原工作液50 μL。

4) 零孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 μL，然后加入生物素抗原工作液50 μL。

5) 樣品孔：加入樣品50 μL，然后加入生物素抗原工作液50 μL。

6) 輕輕搖晃，蓋上封板膜，37℃培養(yǎng)箱中孵育30 min。

7) 將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用。

8) 第一次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

9) 加入50 μL親和素-HRP工作液到零孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中，輕輕搖晃，蓋上封板膜，37℃培養(yǎng)箱中孵育30 min。

10) 第二次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

11) 顯色：每孔先加入顯色劑A 50 μL，再加入顯色劑B 50 μL，酶標(biāo)板覆膜，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 min左右。 提示：注意不定時(shí)觀察孔板，根據(jù)每孔顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng)孵育時(shí)間，但不可超過(guò)30 min。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí)（前4個(gè)孔出現(xiàn)明顯藍(lán)色梯度），即可終止。

12) 終止：每孔加入終止液50 μL。（注：終止液的加入順序應(yīng)盡量與顯色液的加入順序相同）

13) 測(cè)定：以空白孔調(diào)零孔，在酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后10 min以內(nèi)進(jìn)行。

14) 計(jì)算：根據(jù)濃度和OD值算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，建議用專(zhuān)用計(jì)算軟件進(jìn)行計(jì)算。

濃度	Blank	S5	S4	S3	S2	S1	S0
OD值	VB	V5	V4	V3	V2	V1	V0
校準(zhǔn)值	VB-VB	V5-VB	V4-VB	V3-VB	V2-VB	V1-VB	V0-VB

5.操作總結(jié)

 

注意事項(xiàng)

 

1.請(qǐng)勿將本試劑盒的試劑與其他公司的試劑混用以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.需要消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

3.避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

4.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5.本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

相關(guān)產(chǎn)品推薦

產(chǎn)品	貨號(hào)	規(guī)格
PBS(1×)細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)	41403ES	500 mL
PBS(10×)細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)	41404ES	500 mL
10× PBST緩沖液	60146ES	500 mL/500 mL×2

 

 

Ver.CN20250219