產(chǎn)品簡介

 

豬流行性腹瀉病毒（PEDV）RT-qPCR 檢測試劑盒包含了豬流行性腹瀉病毒（PEDV）反應(yīng)液（含引物探針），酶Mix，陰性對照（RNase-free H2O），陽性對照和內(nèi)標(biāo)。本產(chǎn)品含有 UDG 酶，可有效防止氣溶膠污染風(fēng)險(xiǎn)，適用于豬流行性腹瀉病毒

（PEDV）感染的輔助診斷。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號	11896ES50 / 11896ES60 / 11896ES80 / 11896ES92
規(guī)格	50 T / 100 T / 1000 T / 10000 T

 

組分信息

 

組分編號	組分名稱	11896ES50(50 T)	11896ES60(100 T)	11896ES80(1000 T)	11896ES92(10000 T)
11896-A	PEDV RT-qPCR mix （Primer&Probe）	850 μL	1.7 mL	17 mL	170 mL
11896-B	PEDV Enzyme Mix	100 μL	200 μL	2 mL	20 mL
11896-C	Negative Control	250μL	500 μL	5 mL	50 mL
11896-D	Positive Control	250 μL	500 μL	5 mL	10 mL
11896-E	IC	50 μL	100μL	1 mL	10 mL

【注】 利用熒光定量 PCR 的檢測方法，檢測和區(qū)分環(huán)境樣本中的豬流行性腹瀉病毒（PEDV）。

 

儲(chǔ)存條件

 

1、-25~-15℃保存，有效期 2 年。

2、11896-A 避光保存。

 

使用說明

 

1. 反應(yīng)體系

組分	體積（μL）
11896-A	17
11896-B	2
11896-E	1
模板	1-10
RNase Free H2O	to 30

【注】 1、在監(jiān)控提取過程時(shí)，推薦在樣本中加入內(nèi)標(biāo)模板進(jìn)行提取驗(yàn)證，通常是 100μL 樣本加入 1μL 內(nèi)標(biāo)進(jìn)行提取，同時(shí)在反應(yīng)體系中將內(nèi)標(biāo)組分的 1μL 更換為 DEPC 水。

2、采用核酸提取試劑盒提取的各類樣本中的病毒核酸，或自動(dòng)化提取儀提取的各類樣本中的病毒核酸，提取后的核酸于-20℃保存。

按上述體系配置反應(yīng)液，建議最后加入模板，防止交叉污染。加入模板后，密封反應(yīng)管，瞬時(shí)離心。每次實(shí)驗(yàn)均應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。將所有 PCR 擴(kuò)增管放在熒光 PCR 儀上進(jìn)行檢測，FAM 通道采集目標(biāo)熒光信號，Cy5 通道采集內(nèi)標(biāo)熒光信號。 

2. 參考擴(kuò)增程序

1. 常規(guī)參考擴(kuò)增程序

 

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
反轉(zhuǎn)錄	50℃	10 min	1
預(yù)變性	95℃	5 min	1
變性 退火/延伸	95℃ 60℃	15 sec 30 sec	45

 

2. 快速參考擴(kuò)增程序（以 ABI Quant Studio 5 為例）

 

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
反轉(zhuǎn)錄	50℃	3 min	1
預(yù)變性	95℃	1 min	1
變性 退火/延伸	95℃ 60℃	3 sec 10 sec	45

 

3. 適用機(jī)型

包含但不限于以下儀器:

Thermo Scientific: ABI 7500，ABI Quant Studio 5；

上海宏石醫(yī)療科技: SLAN-96S。

 

4. 結(jié)果分析

1. 試劑盒有效性判定

11896-D 陽性對照，Cy5 通道內(nèi)標(biāo)穩(wěn)定起峰，F(xiàn)AM 通道 Ct 值應(yīng)Ct≤38 且出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線；

11896-C 陰性對照，Cy5 通道內(nèi)標(biāo)穩(wěn)定起峰，F(xiàn)AM 通道應(yīng)無 Ct 值或Ct 值≥38 且無特異性擴(kuò)增曲線。

2. 檢測結(jié)果的判定

根據(jù)下表對檢測結(jié)果進(jìn)行判定

序號	FAM	Cy5	結(jié)果判定
1	Ct≥40 或 UNDET	穩(wěn)定起峰	陰性
2	Ct≤38	穩(wěn)定起峰	陽性
3	38<Ct≤40 穩(wěn)定起峰	需重新測試，Ct 值仍在此區(qū)間且有正常的擴(kuò)增曲線，則判斷為陽性，否則判斷為陰性
4	Ct≤38、38<Ct≤40 或Ct＞40	不起峰	測試無效