桿狀病毒-昆蟲細胞（Baculovirus-Sf9）表達平臺具有獨特的優(yōu)勢，使其成為許多生物制品生產(chǎn)的有吸引力選擇。在此情況下，建立合適的檢測方法監(jiān)測生產(chǎn)工藝，控制Sf9細胞等宿主昆蟲細胞殘留核酸限度，以確保產(chǎn)品的安全性和質(zhì)量已經(jīng)成為監(jiān)管機構(gòu)和行業(yè)內(nèi)關(guān)注的重點。

嚴格的純化工藝可以去除一部分宿主細胞DNA（HCD）等殘留雜質(zhì)成分，但產(chǎn)品中仍然可能會有HCD殘留，這些殘留的外源宿主細胞DNA會引發(fā)潛在的安全問題（如潛在致瘤性、傳染性，甚至增加免疫源性或?qū)е峦蛔儯訦CD檢測項目是生物制品生產(chǎn)工藝中重要的質(zhì)量檢測指標之一。各國的藥典法規(guī)也相繼出臺了針對生物制品中外源宿主DNA殘留量限度的規(guī)定。

《中國藥典》2020年版三部規(guī)定，以細胞基質(zhì)生產(chǎn)生物制劑外源宿主細胞DNA殘留量不能超過100pg/劑?！稓W洲藥典》（EP10.0）通則規(guī)定的生物制品殘留DNA限度大多為不超過10ng/劑。

美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）發(fā)布的指導原則中指出生物制品宿主細胞DNA殘留限度不得超過100pg/劑，對于大劑量的生物制品（如單克隆抗體），根據(jù)其殘留DNA來源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10ng/劑。

現(xiàn)行各國藥典中生物制品殘留DNA檢測方法主要有4種：雜交法、閾值法、熒光染料法和定量PCR法等。其中，qPCR法具有極高的靈敏度、序列特異性和準確性，可為生物制藥工業(yè)在工藝研究和成品質(zhì)量控制方面提供可靠的檢測手段，現(xiàn)也已成為各生物制品企業(yè)首選檢測方法。

針對上述情況，翌圣生物自主研發(fā)了Sf9和桿狀病毒（AcNPV）DNA殘留檢測試劑盒，基于探針法熒光定量PCR原理，采用多重qPCR方法分別檢測Sf9和桿狀病毒（AcNPV）殘留DNA，Sf9定量限可達1fg/μL，桿狀病毒（AcNPV）定量限可達7copies/μL。還研發(fā)了與之配套使用的宿主細胞殘留DNA樣本前處理試劑盒，以及配套的自動化核酸提取儀器。

 

產(chǎn)品資質(zhì)：

符合法規(guī)：按照EP2.6.7、JP G3和USP 63藥典要求驗證，符合國際權(quán)威機構(gòu)的標準；

配合審計：產(chǎn)品生產(chǎn)符合ISO13485質(zhì)量體系標準，有完善的審計文件；

保障品質(zhì)：試劑盒所需酶原料全自產(chǎn)，且已產(chǎn)業(yè)化，供貨穩(wěn)定；

技術(shù)經(jīng)驗積累：TaqMan法有技術(shù)沉淀，使得Kit靈敏度高；

專注產(chǎn)品性能：Taq酶抗體庫，雙封閉抗體提高了Kit特異性、穩(wěn)定性等。

 

產(chǎn)品特點：

抗干擾性：針對復雜基質(zhì)，樣本加標回收率至少能達到70-130%；

靈敏度高：定量下限(LLOQ)分別為Sf9 1fg/μL，AcNPV 7copies/μL；

精密度高：批內(nèi)重復性高CV＜10%，批間差異小即中間精密度CV＜15%；

專屬性強：特異性檢測Sf9和AcNPV殘留DNA，不受其他外源基因組DNA干擾；

防干擾強：引入內(nèi)部質(zhì)控(IC)，可排除樣本干擾、反應配制異常等因素，有效避免假陰性。

驗證完善：參考ICH Q2（R2）分析方法驗證指導原則，可提供完善的驗證報告。

 

驗證內(nèi)容：

Sf9和AcNPV檢測驗證項目		參考標準or要求	備注
1、試劑盒標準品（參考品）		Sf9細胞基因組DNA和含桿狀病毒(AcNPV)基因序列的質(zhì)粒DNA
2、線性范圍	標曲范圍	參考說明書或?qū)嶋H情況（Sf9 3fg/μL~300pg/μL，AcNPV 2.12×101～2.12×106copies/μL）
	R2	≥0.98（P.s.本試劑盒≥0.99）	藥典要求
	斜率	-3.1~-3.8（P.s.本試劑盒-3.1~-3.6）	藥典要求
	擴增效率	90%~110%（P.s.對應的斜率-3.1~-3.6，行業(yè)內(nèi)要求）
3、準確性	回收率	50%~150%（P.s.本試劑盒70~130%）	藥典要求
4、精密度	重復性	CV＜10%
	中間精密度	CV＜15%
5、專屬性		不受其他來源基因組DNA的干擾
6、靈敏度	定量限	Sf9 1fg/μL，AcNPV 7copies/μL
7、耐用性	儀器適用性	Thermo：ABI 7500、ABI QuantStudio5； Bio-Rad：CFX96 Optic Module； 上海宏石：SLAN-96S； 博日：LineGene9600.
8、穩(wěn)定性	加速穩(wěn)定性	37℃穩(wěn)定14天，2~8℃穩(wěn)定30天
	反復凍融	≥10次
	有效期	-25~-15℃保存2年
9、空白限	無模板對照（NTC）	重復96次qPCR擴增曲線未起峰
	陰性抽提對照（NCS）	重復48次qPCR擴增曲線未起峰

 

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品	貨號	品名	規(guī)格
樣本前處理 試劑盒	18461ES	MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit 磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒（瓶裝）	25T/100T
	18467ES	MolPure® Mag48 Sample Preparation Kit FN 磁珠法48孔樣本前處理試劑盒FN（預封裝)	3×16T/ 6×16T
核酸提取儀器	80511ES	48通道自動化核酸提取儀	48通量
Sf9和AcNPV殘留DNA 檢測試劑盒	41330ES	Sf9&AcNPV DNA Residue Detection Kit Sf9和桿狀病毒（AcNPV）DNA殘留檢測試劑盒	50T/100T