產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Human CD3 50 nm Nanobeads 可以用于基于 CD3抗原表達(dá)的人類細(xì)胞分離。CD3在所有T細(xì)胞上表達(dá)，并與T細(xì)胞受體相關(guān)。本產(chǎn)品由 CD3單克隆抗體與50 nm磁珠偶聯(lián)而成，從而實(shí)現(xiàn) CD3陽性T細(xì)胞的分選。

其原理是CD3 50 nm磁珠直接與細(xì)胞結(jié)合后，將細(xì)胞與磁珠混合懸浮液加載到放置在MACS Separator的分離磁鐵中的MS或LS柱，或其他合適的分選柱中。磁分離后留在磁柱中的細(xì)胞即為陽性分選的CD3表達(dá)細(xì)胞，從而進(jìn)行后續(xù)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究；也可收集分離的下清液，即為陰性分選的無CD3表達(dá)細(xì)胞。 

 

產(chǎn)品信息

貨號(hào)	37601ES05
規(guī)格	2 mL
分選能力	Up to 1×109 cells

 

產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)（Matrix）	葡聚糖納米磁珠
配體（Ligand）	Anti-CD3 antibody
粒徑（Particle Size）	水合粒徑(DLS)：50 nm，投射電鏡(TEM)：15-20 nm
分選能力（Separation Capacity）	Up to 5×108 cells/mL beads
儲(chǔ)存緩沖液（Storage Buffer）	1 X PBS (pH7.2-7.4) containing 2 mM EDTA, 0.5% HSA buffer without Ca2+

 

儲(chǔ)存條件

2~8℃保存，有效期6個(gè)月，嚴(yán)禁凍存。

 

使用說明

1. 所需材料準(zhǔn)備

1. 分離緩沖液：1 X PBS (pH7.2-7.4) containing 2 mM EDTA, 0.5% HSA（人血清白蛋白）buffer without Ca²⁺，2~8℃保持冷卻。

【注】：不推薦使用含有Ca²⁺或Mg²⁺的PBS。

        HSA可以被BSA（牛血清白蛋白）、人血清或胎牛血清（FBS）替代，EDTA可以被檸檬酸鈉替代。

2. 分選柱和分離器：MS或LS柱，或其他合適的分選柱。MACS Separator的分離磁鐵。

2. 樣品準(zhǔn)備

1. 確定細(xì)胞數(shù)。
2. 將細(xì)胞懸浮液在300 g 轉(zhuǎn)速下離心 10 分鐘，完全吸取上清液。

3）按照1x10⁷個(gè)細(xì)胞用 80μL 緩沖液重懸細(xì)胞顆粒 (可以提前用30 μm細(xì)胞過濾網(wǎng)去除粘連的、大塊裝的細(xì)胞), 每1x10⁷個(gè)細(xì)胞加入20 μL CD3分選磁珠，用于 CD3陽性細(xì)胞分離。如果希望同時(shí)標(biāo)記CD3和另一種CD蛋白，建議使用 60μL 緩沖液重懸細(xì)胞顆粒，并加入20 μL CD3分選磁珠和20μL另一種CD蛋白的抗體分選磁珠。(每1x10⁷個(gè)細(xì)胞)

4）混合均勻，并在冰箱中孵育15分鐘(2~8℃)。

5）每 1x10⁷細(xì)胞加入1-2 mL的緩沖液清洗細(xì)胞，然后300 g離心10分鐘，完全吸出上清液。

6）在500 μL的緩沖液中重新懸浮最多1x10⁸個(gè)細(xì)胞，對(duì)于 1x10⁷或更少的細(xì)胞重懸于50 μL的緩沖液中，對(duì)于更高的細(xì)胞數(shù)量，相應(yīng)地增加緩沖液體積。

3. 磁性細(xì)胞分離

1）使用MS或LS柱進(jìn)行磁分離。

2）將分選柱置于合適的MACS Separator的分離磁鐵中。

3）用適量緩沖液沖洗色譜柱，MS: 500 μL，LS: 3 mL。

4）將細(xì)胞懸浮液滴在分選柱上，收集含有未標(biāo)記細(xì)胞的流出液。

5）用適量緩沖液沖洗分選柱，收集通過的未標(biāo)記細(xì)胞，并與步驟4）的流出液混合。MS: 3X500 μL，LS:3x3 mL。

【注】：一旦分選柱儲(chǔ)液器空，就立即加入等量的緩沖液進(jìn)行清洗步驟。

6）從分離磁鐵中取出分選柱，將其置于合適的收集管中。將適量的緩沖液移到分選柱上。將柱塞推入分選柱并沖出磁性標(biāo)記的細(xì)胞。MS:1 mL，LS:5 mL。

7）然后可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并分析以評(píng)估其純度或用于下游應(yīng)用。不需要移除分選磁珠。為確保細(xì)胞活性，應(yīng)將所需的細(xì)胞立即重新懸浮在細(xì)胞培養(yǎng)基中。

 

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。