產(chǎn)品說明書
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已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品描述
RNA酶廣泛存在環(huán)境中，很容易降解新鮮采取的動植物組織、血液、體液等樣本中的RNA，從而使得研究人員在收集完新鮮樣本需要做液氮速凍，或者立即進(jìn)行RNA的純化，這給研究人員的戶外工作帶來諸多不便。
RNAsafe動植物組織穩(wěn)定液（RNAsafe Tissue Stabilizer）是專門開發(fā)用于穩(wěn)定并保護(hù)采集樣本內(nèi)RNA，作為一種無毒溶液，可迅速滲入組織，滅活內(nèi)源RNase。
產(chǎn)品特點
操作極其簡便：只需要將新鮮組織切成合適大?。?/span>≤0.5 cm）的組織塊，浸入5~10倍體積的RNAsafe中即可。
穩(wěn)定周期長：經(jīng)RNAsafe浸潤的組織/細(xì)胞可在37℃保存1天，室溫保存1周，4℃保存4周，-20℃/-80℃長期保存。
下游兼容性廣：幾乎兼容于所有的RNA分離方法，如HieffTM Total RNA Extraction Reagent（貨號：10606ES60），以及幾乎所
有的商業(yè)化RNA抽提試劑盒，包括離心柱抽提法，磁珠純化法等。
材料應(yīng)用性廣：可用于多種動植物組織（如腦、心臟、肝臟、胰臟、腎臟、脾臟、睪丸、肌肉、植物的莖葉等）的保存，還可用于酵母、組織培養(yǎng)細(xì)胞等。
操作流程
1. 樣品處理
A. 動物組織：RNAsafe穩(wěn)定液不會破壞動物組織結(jié)構(gòu)的完整性。
處理過程：將組織切成合適大小后（≤0.5 cm），然后加入5倍體積RNAsafe。
注：已浸入RNAsafe的組織經(jīng)平衡一段時間后，可從溶液中取出，切成更小的組織塊（≤0.5 cm大小），再重新放回RNAsafe。
注意：某些組織（如骨頭）具有比較弱的液體滲透性，不適合用本品進(jìn)行RNA保護(hù)。
B. 植物組織：本品對于柔軟的植物組織（如嫩葉，嫩莖）可直接滲透，且達(dá)到理想的RNA保護(hù)效果。
處理過程：將組織切成合適的大?。?/span>≤0.5 cm）后，加入5倍體積的RNAsafe穩(wěn)定液。
注：某些植物組織天生具有的屏障（如葉子表面的蠟層）可阻礙RNAsafe滲透，對于此類組織，往往需要破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。
C. 組培細(xì)胞、白細(xì)胞等：按照標(biāo)準(zhǔn)實驗操作收集細(xì)胞沉淀（用PBS清洗1-2次）。之后加入5～10倍體積的RNAsafe。
D. 酵母：離心棄上清，收集約108個細(xì)胞(12,000g，2 min)。加入0.5～1 mLRNAsafe。
長期保存：應(yīng)置于RNAsafe中，4℃放置1小時。然后離心棄上清，收集酵母細(xì)胞(12,000g，5 min)，-80℃保存。
2. 樣品保存
A. -80℃保存：樣品結(jié)凍保存。對于歸檔的樣本，建議-80℃保存。該保存條件下，樣本可長期保存，保護(hù)效果最佳。
操作過程：樣本4℃浸透過夜，然后再轉(zhuǎn)移至-80℃。
如果中間需要做樣本的融化，建議取出4℃浸透過夜的組織或離心收集細(xì)胞，然后再凍存于-80℃。RNAsafe保護(hù)后的樣本抽提RNA時，可直接放在室溫融化，之后重新凍上，不會造成RNA量的嚴(yán)重?fù)p失或者RNA完整性的明顯破壞。
B. -20℃保存：同樣適用于歸檔樣本的保存。樣本不會在-20℃結(jié)凍，但可能會形成結(jié)晶。該保存條件下，樣本可長期保存，不會對后續(xù)RNA分離造成影響。
操作過程：樣本4℃浸透過夜，然后再轉(zhuǎn)移至-20℃。RNAsafe保護(hù)后的樣本抽提RNA時，可直接放在室溫融化，之后重新凍上，不會造成RNA量的嚴(yán)重?fù)p失或者RNA完整性的明顯破壞。
C. 4℃保存：大部分樣品放到RNAsafe中，可穩(wěn)定保護(hù)1個月，不會有明顯的RNA降解發(fā)生。
D. 25℃（室溫）保存：建議低溫環(huán)境保存。若條件不允許，請將RNAsafe穩(wěn)定液于冰上冷卻幾個小時，然后將樣品浸入此溶液中，室溫穩(wěn)定保存1周，不會有明顯的RNA降解發(fā)生。
E. 37℃保存：純化的RNA樣本于37℃孵育24 h，結(jié)構(gòu)依然完整。
3. RNA提取
因RNAsafe滅活RNase的過程是可逆的，受保護(hù)的樣本使用前務(wù)必不要清洗掉RNAsafe。
A. 組織樣本：用滅菌鑷子從RNAsafe中取出組織塊，然后用干凈的吸水紙吸掉表面液體。之后立即置于裂解液中勻漿。
B：細(xì)胞樣本：由于RNAsafe密度較大，此時需要使用大于普通介質(zhì)的離心力。一般來說，保存在RNAsafe中的細(xì)胞能承受更高的轉(zhuǎn)速，并維持細(xì)胞的完整性。大部分細(xì)胞可通過5,000g，5 min離心收集沉淀。
注意：由于不同細(xì)胞承受離心力會有差異，建議先用少量的細(xì)胞進(jìn)行離心速度承受性的測試。
C. 抽提RNA：按照RNA抽提Protocol進(jìn)行即可。
運輸與保存方法
室溫運輸，室溫保存，有效期5年。
注意事項
1. 經(jīng)RNAsafe處理的樣本還可做基因組DNA的提取，甚至蛋白質(zhì)的提取。但由于RNAsafe會變性蛋白質(zhì)，因此不適合天然蛋白的提取。
2. 本RNAsafe室溫保存過程中可能會產(chǎn)生一些沉淀，在使用前只需放到37℃溫育片刻，并間斷搖晃重溶，不影響使用。
3. 本RNAsafe僅適用于新鮮組織，不可用于冰凍組織。若需要保護(hù)冰凍組織內(nèi)RNA的完整性，可使用我司的RNAsafe-ICE冰凍動植物組織RNA穩(wěn)定-過渡溶液（貨號：10605ES60），即可將冰凍組織恢復(fù)為勻漿用的組織狀態(tài)，并進(jìn)行RNA抽提的過程中，維持RNA的穩(wěn)定性。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
5. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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10605ES60 |
100 mL |
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10401ES60/80 |
100 mg/1 g |
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10402ES08/50 |
5/50 g |
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10403ES81/88/ 92 |
1500/3000/10000 U |
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10404ES08/10 |
5/10 g |
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10606ES60 |
100 mL |
HB210722
