產(chǎn)品說明書
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡介
2×Hieff® HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye)是即用型的PCR預(yù)混合溶液，含有Hieff® HotStart Taq DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系，只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增，大大簡化了實(shí)驗(yàn)的操作步驟，可以高通量操作并提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性。Hieff® HotStart Taq DNA Polymerase是經(jīng)過配體修飾的熱穩(wěn)定Taq DNA Polymerase，該配體可以隨溫度變化來調(diào)節(jié)DNA聚合酶活性。在室溫下酶活性被完全封閉，經(jīng)95°C加熱后活性才被釋放。Hieff® HotStart DNA Polymerase的激活時(shí)間只需要2-3 min，兼容現(xiàn)有的PCR程序。本產(chǎn)品防止了在樣品準(zhǔn)備及反應(yīng)升溫階段產(chǎn)生非特異擴(kuò)增，可以有效地進(jìn)行基因分型實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品用途
本產(chǎn)品主要應(yīng)用于小鼠基因型鑒定。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測：20 μL本品和0.6 μg λDNA -HindIII，37°C下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
核酸內(nèi)切酶殘留檢測：20 μL本品和1 μg λDNA，37°C溫育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測：50 μL體系中，加入25 μL本品，以無菌ddH2O為模板，擴(kuò)增E.coil 16s rDNA基因。30個(gè)循環(huán)后擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無擴(kuò)增條帶。
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期2年。
使用說明
- 推薦PCR反應(yīng)體系
|
組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
|
2×Hieff® HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye) |
25 |
1× |
|
模板 |
x |
- |
|
正向引物F（10 μM） |
2 |
0.4 μM |
|
反向引物R（10 μM） |
2 |
0.4 μM |
|
ddH2O |
Up to 50 |
- |
表1 PCR反應(yīng)體系
不同模板的推薦使用量：
|
模板種類 |
使用量范圍（50 μL反應(yīng)體系） |
|
基因組DNA |
50–100 ng |
|
質(zhì)粒DNA |
0.1-20 ng |
|
cDNA |
1-5 μL (不超過反應(yīng)體系的1/10) |
表2 不同模板的推薦使用量
- 反應(yīng)程序
|
循環(huán)步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
|
預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
變性 |
95℃ |
30 sec |
35 |
|
退火* |
50-60℃ |
30 sec |
|
|
延伸** |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
終延伸 |
72℃ |
10 min |
1 |
表3 PCR反應(yīng)程序
*推薦退火溫度和時(shí)間：退火溫度推薦使用50-60℃。退火時(shí)間推薦設(shè)置為30 sec，可以在20-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度和時(shí)間。
**延伸溫度和時(shí)間：溫度推薦使用72℃。時(shí)間推薦使用30-60 sec/kb。
***擴(kuò)增產(chǎn)物：請將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止DNA發(fā)生降解。
注意事項(xiàng)
- 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
- 本產(chǎn)品僅作科研用途！
Ver.CN20240719
