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          看似簡單的轉(zhuǎn)化也是分子克隆中關(guān)鍵的一環(huán)
           
          

          

          2022克隆王大賽數(shù)據(jù)審核階段明天（5月20日）就截止啦。5月23日，克隆王大賽大眾投票正式開啟，投票從5月23日到5月27日，持續(xù)5天，同學(xué)們趕緊準備為自己拉票吧~
          


           
          


          

          

          

          

          

          說到投票，就不得不提投票規(guī)則，同學(xué)們注意啦！在投票期間，每天每人僅能給1份實驗數(shù)據(jù)投1票，最多可以給5份實驗數(shù)據(jù)投票。
          

          

          

          

          

          


          

          

          

          

          

          

           
          


          小翌溫馨提醒：請勿使用刷票軟件刷票，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，將取消參賽資格。
          


           
          


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          投票頁面
          


           
          


          這時，肯定有同學(xué)會問，那去哪里投票呢？
          


           
          


          5月23日，投票渠道會在【翌圣生物YEASEN】公眾號菜單欄正式開放，記得保持關(guān)注哦~
          


           
          


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          說完投票，小翌帶大家進入今天的主題——轉(zhuǎn)化。
          


           
          

          

          

          

          

          

          


          轉(zhuǎn)化是分子克隆的關(guān)鍵步驟，其目標是產(chǎn)生重組DNA分子的多個拷貝。在轉(zhuǎn)化過程中，質(zhì)粒DNA被引入到適當?shù)木曛?，以便菌株可以?fù)制目標序列，以用于后續(xù)進一步的分析或操作。轉(zhuǎn)化通常有兩種方法，分別為電轉(zhuǎn)化和化學(xué)轉(zhuǎn)化。化學(xué)轉(zhuǎn)化是分子克隆實驗中是最常用的轉(zhuǎn)化方法。
          


           
          

          


          

          

          

          

          

          

          

          

          化學(xué)轉(zhuǎn)化實驗步驟
          

          

          

          

          

          

          

          

          


          

           
          

          


          

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          其核心步驟主要分為三步：
          

          

          

          

          

          


          

          ① 質(zhì)粒DNA進入細胞；
          


          ② 細胞恢復(fù)；
          


          ③ 細胞接種培養(yǎng)。
          


           
          

          


          

          

          

          

          

          

          

          

          質(zhì)粒DNA進入細胞
          

          

          

          

          

          

          

          

          


          

          常見的化學(xué)感受態(tài)細胞通常采用CaCl2法進行制備。感受態(tài)細胞的細胞膜磷脂雙分子層因為鈣離子的存在形成液晶結(jié)構(gòu)，細胞壁的通透性發(fā)生變化，外源帶負電荷的DNA會和帶正電荷的鈣離子吸附在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣復(fù)合物。42℃條件下，感受態(tài)細胞進入應(yīng)激狀態(tài)，細胞膜發(fā)生變化，出現(xiàn)許多間隙，吸附的DNA進入細胞。熱沖擊后，在低溫條件下，間隙收縮。
          


           
          

          


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          圖片來源：Revisiting the Mechanisms Involved in Calcium Chloride Induced Bacterial Transformation
          


           
          

          


          

          

          

          

          

          注意事項：
          

          

          

          

          

          


          

           
          

          


          

          1. 為保證良好的實驗結(jié)果，建議選用轉(zhuǎn)化效率在107cfu/ug以上的感受態(tài)細胞；
          


           
          


          2. 加入的外源DNA量過多或者體積過大會使轉(zhuǎn)化效率下降，建議加入體積不超過感受態(tài)細胞的十分之一；
          


           
          


          3. 細胞避免反復(fù)凍融，長時間反復(fù)開關(guān)冰箱也會造成感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化效率的下降；
          


           
          


          4. 完成熱沖擊后，需迅速將感受態(tài)細胞置于冰上，保證DNA完全進入感受態(tài)細胞中。
          


           
          

          


          

          

          

          

          

          

          

          

          細胞恢復(fù)
          

          

          

          

          

          

          

          

          


          

          轉(zhuǎn)化后的細胞需在無抗生素的液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，以保證外源DNA表達相關(guān)抗生素抗性基因，提高后續(xù)涂板細胞的活力和克隆效率。
          


           
          

          


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          注意事項：
          

          

          

          

          

          


          

           
          

          


          

          1. 該過程需在超凈臺中進行，無抗生素的培養(yǎng)基受到雜菌污染會影響轉(zhuǎn)化效率，給后續(xù)實驗造成不便；
          


          2. 恢復(fù)時采用的液體培養(yǎng)基建議在37℃下預(yù)熱，以保證細胞的恢復(fù)和生長，提高克隆陽性率；
          


          3. 恢復(fù)的時間和轉(zhuǎn)速根據(jù)所選用的感受態(tài)細胞而來，不同的感受態(tài)最優(yōu)條件會有不同，建議參照商品說明書。
          


           
          

          


          

          

          

          

          

          

          

          

          細胞接種培養(yǎng)
          

          

          

          

          

          

          

          

          


          

           
          

          


          

          細胞的均勻分布對于菌落分析和后續(xù)篩選至關(guān)重要，選用滅過菌的涂布棒或者玻璃珠進行細胞擴散，需保證在細胞懸浮液干燥之前，完成細胞的均勻擴散。
          


           
          

          


          

          

          

          

          

          注意事項：
          

          

          

          

          

          


          

          1. 金屬制涂布棒滅菌時若采用酒精燈灼燒滅菌，需等待涂布棒冷卻后進行涂布接種；
          


          2. 避免使用長時間存放的培養(yǎng)板，以保障抗生素活性、菌株生長營養(yǎng)所需；
          


          3. 在細胞接種之前，應(yīng)將培養(yǎng)基預(yù)熱至適當?shù)纳L溫度并且無冷凝水，以防止污染和混合菌落；
          


          4. 避免長時間孵育。長時間孵育會導(dǎo)致大菌落融合，并且會在大菌落周圍出現(xiàn)衛(wèi)星菌落。
          


           
          


          除了要了解實驗步驟和注意事項外，選好感受態(tài)細胞也很重要！
          


           
          


          翌圣生物利用改良的生產(chǎn)菌株，采用嚴格的生產(chǎn)工藝，制備了高效、穩(wěn)定、適用性廣的高效感受態(tài)（＞108 cfu/ug DNA）。另外，-80℃超低溫冰箱保存，全程“三明治”結(jié)構(gòu)的十斤干冰運輸。多重保障幫您解決轉(zhuǎn)化效率低的問題，助您輕松做轉(zhuǎn)化，順利做克隆。
          


           
          

          


          

          

          

          

          

          

          

          

          產(chǎn)品優(yōu)勢
          

          

          

          

          

          

          

          

          


          

          轉(zhuǎn)化效率高：＞108cfu/ug DNA
          


          批次間穩(wěn)定：批次間質(zhì)量對比無差異
          


          無雜菌污染：涂板培養(yǎng)無雜菌
          


          無抗性偏好：各種抗生素均可適用
          


          冷鏈運輸：十斤干冰運輸
          

          


          

          

          

          

          

          

          

          

          產(chǎn)品性能
          

          

          

          

          

          

          

          

          


          

          1. 感受態(tài)細胞批次間穩(wěn)定強，轉(zhuǎn)化效率高（＞108cfu/ug DNA）
          

          


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          圖1. TOP10、DH5α和BL21三種感受態(tài)不同批次的轉(zhuǎn)化效率穩(wěn)定。
          


           
          


          2. 感受態(tài)細胞無雜菌污染
          


           
          

          


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          圖2. 感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化效率為＞108cfu/ug DNA（A/B），感受態(tài)細胞涂布卡納、羧芐平板上無雜菌污染（C/D/E/F）。
          


           
          

          


          

          

          

          

          

          

          

          

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          應(yīng)用場景
          
			          		
			
			
          產(chǎn)品名稱
          
			          		
			
			
          貨號
          
			          		
			
			
          規(guī)格
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          高效感受態(tài)
          
			          		
			
			
          TOP10 Chemically Competent Cell Top10化學(xué)感受態(tài)細胞
          
			          		
			
			
          11801ES80
          
			          		
			
			
          10×100 μL
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          DH5α Chemically Competent Cell DH5α化學(xué)感受態(tài)細胞
          
			          		
			
			
          11802ES80
          
			          		
			
			
          10×100 μL
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          BL21 (DE3) Chemically Competent Cell  BL21 (DE3)化學(xué)感受態(tài)細胞
          
			          		
			
			
          11804ES80
          
			          		
			
			
          10×100 μL
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          一步法快速重組克隆
          
			          		
			
			
          Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit一步法快速克隆試劑盒
          
			          		
			
			
          10911ES20
          
			          		
			
			
          20 T
          
			          		
		
          
		
          
		
          
		
          
			
			
          Hieff Clone® Plus Multi One Step Cloning Kit多片段一步法快速克隆試劑盒
          
			          		
			
			
          10912ES10
          
			          		
			
			
          10 T
          
			          		
		
          
		
          
		
          
		
          
			
			
          Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit通用型一步法快速克隆試劑盒
          
			          		
			
			
          10922ES20
          
			          		
			
			
          20 T
          
			          		
		
          
		
          
		
          
		
          
			
			
          高保真酶83倍Taq
          
			          		
			
			
          Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶
          
			          		
			
			
          10153ES60
          
			          		
			
			
          100 U
          
			          		
		
          
		
          
			
			
          2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix(With Dye) 高保真酶預(yù)混液
          
			          		
			
			
          10154ES03
          
			          		
			
			
          1 mL
          
			          		
		
          
	          

          


           
          


           
          

           
           
           
           
           
           
           
          400-6111-883