胰蛋白酶(Trypsin, EC3.4.21.4)，又稱胰酶，是從牛、羊、豬的胰臟中所提取的一種絲氨酸蛋白水解酶，在脊椎動物中作為消化酶而起作用。胰酶是由223個氨基酸組成的單鏈多肽，包括兩個亞基，α亞基（有2個多肽鏈構成）和β亞基（有1個多肽鏈構成），特異性切割帶正電荷賴氨酸和精氨酸羧基端，但當這兩個氨基酸緊連脯氨酸或切割位點任一邊緊鄰酸性殘基時，會減緩胰酶水解速率。

圖1 胰蛋白酶分子結構式(CAS NO. 9002-07-7)

由于胰酶可以作用跨膜蛋白和胞外基質中的蛋白質，如：鈣粘素、整聯(lián)蛋白等，膠原蛋白、纖連蛋白、層粘連蛋白等，故胰酶現(xiàn)常用于解離組織和單層細胞。雖然胰蛋白酶能使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散，但不同的組織或者細胞對胰酶的反應是不一樣的，分散細胞的活性還與胰酶濃度、反應溫度和時間有關。在pH條件為7-9、溫度為37℃的條件下是胰酶分散細胞的作用能力最強，將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑，用于中和Ca2⁺和Mg2⁺以防止其抑制胰蛋白酶活性。此外，胰酶水解活性可被多種抑制劑抑制，包括：1）有機磷化合物，如氟磷酸異丙酯；2）來源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制劑；3）銀離子；4）特定蛋白酶抑制劑，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、DFP、亮抑肽酶、PMSF、TLCK等。

胰酶應用于貼壁細胞

實驗過程

1、移除細胞培養(yǎng)液，用不含Ca2⁺和Mg2⁺的無菌PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液潤洗貼壁細胞，去除殘余血清；

2、加入適量胰蛋白酶溶液至完全覆蓋細胞，室溫孵育幾分鐘，不同的細胞消化時間有所不同，對于貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間。不同的細胞消化時間有所不同，對于貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間。

3、細胞顯微鏡下觀察，有明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化，加入含血清的細胞培養(yǎng)液終止消化。注意避免過度消化，防止胰酶對細胞造成的損傷。

4、輕輕反復吹打將細胞從培養(yǎng)板底盡可能吹離，收集至無菌離心管；

5、室溫500 g離心5min后收集沉淀細胞進行下一步操作或將細胞凍存；

注意事項

1、使用胰酶時應把握好濃度、溫度和時間，以免因消化過度對細胞造成損傷。

2、配置胰酶溶液時應選用不含Ca2⁺和Mg2⁺的HBSS，以免降低胰酶的活性。

3、建議用含有血清培養(yǎng)液來終止胰酶對細胞消化作用。

4、胰酶溶液不宜4℃長期保存，切忌反復凍融，建議分裝凍存。

Yeasen推出系列胰酶產(chǎn)品，經(jīng)過濾除菌，經(jīng)過豬細小病毒和支原體實驗測試

可以直接用于培養(yǎng)細胞和組織的消化，不同批次性能穩(wěn)定！

圖2 Yeasen胰蛋白酶產(chǎn)品

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