RAW264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)貼壁細胞培養(yǎng)全攻略
RAW264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)屬貼壁細胞，大家細胞總是養(yǎng)不好、消化傳代困難，實驗數(shù)據(jù)不理想的罪魁禍首。除此之外，細胞生長緩慢、貼壁困難，也是大家在培養(yǎng)細胞過程中出現(xiàn)的最常見問題，今天小翌就來給大家整理一份RAW264.7細胞培養(yǎng)全攻略?。?！
▲ 圖源Pixabay
RAW264.7細胞具有強吞噬能力，細胞在吞噬抗原后釋放趨化因子，促使細胞分化出偽足，因此造成細胞極難消化。細胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都易促使細胞呈現(xiàn)梭形，造成最終實驗數(shù)據(jù)不理想。
有時細胞看起來一切正常，但卻生長緩慢，究其原因多半是感染了支原體，支原體感染導(dǎo)致生長變慢、狀態(tài)變差，雖不會馬上致死，但會影響其機體內(nèi)的各種參數(shù)，且難以被觀察到，是影響細胞狀態(tài)的隱形殺手。
在日常培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)RAW264.7細胞容易出現(xiàn)的問題主要為以下幾種：1.復(fù)蘇不易成功2.細胞形態(tài)變異明顯3.消化困難4.細胞生長緩慢，當你的細胞培養(yǎng)遇到上述瓶頸，不妨試一試以下幾種解決辦法。
復(fù)蘇難以成功
原因：RAW264.7對空間十分敏感，復(fù)蘇密度太高，細胞增殖太快，加劇細胞營養(yǎng)缺失，加速細胞老化。
解決辦法：T75培養(yǎng)瓶復(fù)蘇細胞數(shù)量控制在104~105
細胞變異明顯
原因：細胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都會促使該細胞呈現(xiàn)梭形、長梭形
解決辦法：改善細胞培養(yǎng)環(huán)境，例如與細胞接觸的玻璃器皿均高溫滅菌，換flask培養(yǎng)瓶，采用一次性器具，使用質(zhì)量較高的胎牛血清
消化困難
原因：細胞老化后，細胞偽足多且長，使細胞難消化，使用胰酶或細胞刮會對細胞損傷較大
解決辦法：無需胰酶使用吸管重復(fù)吹打，可消化大部分正常狀態(tài)的細胞；但若細胞為“長腳”狀態(tài)，即使加入胰酶消化超過10min，也難以消化下來，勉強消化，對后續(xù)的實驗數(shù)據(jù)也有較大影響。
生長緩慢
原因：支原體污染會導(dǎo)致細胞生長緩慢，甚至難以貼壁
解決辦法：定期進行支原體檢測（如翌圣生物一步法恒溫支原體檢測試劑），如發(fā)現(xiàn)支原體污染，即刻使用支原體去除試劑（如翌圣生物MycAwayTM 支原體去除試劑）
▲ 圖1.一步法支原體檢測操作流程
▲ 圖2.Yeasen MycAwayTM 支原體去除效果的展示
▍ 支原體去除試劑的特點
» 穩(wěn)定性強：-20℃試劑能較長時間保存并保持高效用；
» 操作簡單：只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；
» 起效快：最快3天即可見效；
▲ 圖3.支原體去除試劑細胞毒性檢測圖示
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類別 |
產(chǎn)品 |
貨號 |
規(guī)格 |
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支原體檢測 |
40601ES10/20 |
10/20 assays |
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MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測試劑盒 |
40612ES25/60 |
25/100T |
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支原體 |
40605ES02/03 |
1 / 2×500 mL |
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MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原體去除試劑（1000×） |
40607ES03/08 |
1/ 5×1mL |
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支原體 |
MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention MycAway™ 支原體預(yù)防試劑（2000×） |
40608ES03/08 |
1/5×1 mL |
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MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 細胞培養(yǎng)箱水盤1號消毒衛(wèi)士 |
40609ES60 |
100 mL |
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MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath |
40610ES60 |
100 mL |
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