隨著生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展，DNA甲基化（DNA methylation）標(biāo)志物在癌癥診斷、治療選擇及預(yù)后評(píng)估中的重要性日益凸顯。在現(xiàn)代腫瘤治療領(lǐng)域，腫瘤 DNA 甲基化標(biāo)志物作為一種重要的生物標(biāo)志物，在癌癥的早期診斷、治療選擇及預(yù)后評(píng)估中扮演著越來(lái)越關(guān)鍵的角色。

圖1.正常細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞DNA甲基化的狀態(tài)

DNA 甲基化是一種 DNA 的共價(jià)修飾，具體是指DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferases，DNMTs）將甲基加到 DNA CpG 序列中胞嘧啶的 5'碳位，形成 5?甲基胞嘧啶的過(guò)程。成簇的 CpG被稱為 CpG島（CpG islands，CGIs），主要位于結(jié)構(gòu)基因的啟動(dòng)子和第一外顯子區(qū)域。DNA 甲基化標(biāo)志物是癌細(xì)胞中的 DNA異常甲基化改變，這種異常甲基化貫穿于癌癥發(fā)生和發(fā)展的全過(guò)程。

腫瘤DNA甲基化標(biāo)志物檢測(cè)及臨床應(yīng)用專家共識(shí)（2024版）指出：與傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物相比，DNA甲基化標(biāo)志物具有更早期、更無(wú)創(chuàng)、更精準(zhǔn)等優(yōu)點(diǎn)。因此，可以通過(guò)非侵入性方式獲得的痰液、血漿、血清或尿液等樣本進(jìn)行 DNA 甲基化標(biāo)志物檢測(cè)。一些DNA甲基化異常發(fā)生在腫瘤形成的初始階段，通過(guò)檢測(cè)與腫瘤發(fā)展相關(guān)的甲基化標(biāo)志物，可以輔助癌癥早期診斷、評(píng)估進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)。DNA 甲基化標(biāo)志物甲基化水平的增加或降低與腫瘤預(yù)后密切相關(guān)，可用于治療或根治性手術(shù)后評(píng)估腫瘤微小殘留病灶（MRD）和監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)。此外，DNA甲基化標(biāo)志物還可作為化療敏感性的標(biāo)志，某些特定基因的甲基化可能預(yù)示著癌癥對(duì)治療的反應(yīng)，可用于判斷化療藥物的療效，以更好地指導(dǎo)治療方案。

圖2.DNA甲基化標(biāo)志物檢測(cè)技術(shù)方法

甲基化建庫(kù)試劑盒搭配MGI測(cè)序接頭一直以來(lái)為技術(shù)難點(diǎn)，MGI 測(cè)序接頭與 Illumina Y 字型接頭類型存在很大的差異，MGI 測(cè)序接頭 Linear adapter 與 Bubble adapter 長(zhǎng)度不同但兩端互補(bǔ)配對(duì)，因此會(huì)產(chǎn)生小泡狀結(jié)構(gòu)，小泡狀結(jié)構(gòu)會(huì)降低與單鏈DNA的連接效率，影響文庫(kù)產(chǎn)出和檢測(cè)的靈敏度。

Hieff NGS^® Methyl-seq DNA Library Prep Kit for MGI 是針對(duì) MGI 測(cè)序平臺(tái)專業(yè)開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)的新一代 DNA 甲基化建庫(kù)試劑盒，可以滿足甲基化轉(zhuǎn)化后10 pg~250 ng DNA 樣本建庫(kù)。該試劑盒可兼容短至 40 bp 的 DNA 樣本，適應(yīng)于先轉(zhuǎn)化后建庫(kù)。

圖3.不同樣本投入量下的文庫(kù)產(chǎn)量和下機(jī)數(shù)據(jù)基本指標(biāo)

相同的樣本投入量，酶法轉(zhuǎn)化搭配MGI平臺(tái)甲基化建庫(kù)試劑12226的文庫(kù)濃度和數(shù)據(jù)質(zhì)量更高，插入片段更長(zhǎng)，文庫(kù)豐富度更高。

圖4.亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化和酶法轉(zhuǎn)化后的文庫(kù)產(chǎn)量和下機(jī)數(shù)據(jù)基本指標(biāo)